孙 颖，蔡海燕，沈敬山，朱维良，王贺瑶，郭敏亮

(1.扬州大学生物科学与技术学院，江苏扬州 225009;2.中国科学院上海药物研究所，上海 201203)

抑郁症目前已成为世界第4大疾患，到2020年可能成为仅次于心脏病的第2大疾病［1］。研究表明，抑郁症主要是由于生活压力、基因遗传和一些易感因素所导致的［2］。国内外报道抑郁症患者中50% ～85%可反复发作，每年有15%的抑郁症患者自杀［3］，因此抑郁症正成为全球公共健康中的一大主要问题。

5-HT1A受体是5-HT受体家族中第1个被克隆出来的亚型。人类遗传学和图像学研究表明5-HT1A受体与焦虑症、抑郁症、精神分裂症等一系列精神疾病有关，目前临床研究表明，其激动剂能有效改善抑郁症和焦虑症［4］。因此，开发和寻找5-HT1A受体的激动剂具有重要意义，而构建稳定表达人源5-HT1A受体是该受体激动剂筛选的重要方法和手段。

由于5-HT1A受体在胞内可以调节不同的信号通路，针对5-HT1A受体建立稳定细胞株的方法中目前主要有胞内钙信号和cAMP水平的测定［5］。本研究采用化学发光的方法测定胞内cAMP的水平以建立可用于高通量筛选5-HT1A受体激动剂的细胞模型。通过对模型建立过程中工具细胞、共转染质粒比例及化合物孵育时间等方面进行优化，确定模型建立的最佳条件。同时，为了验证化合物在稳定细胞株上的表现活性，实验针对几种经典的5-HT1A受体激动剂展开了相应的研究。

1 材料与方法

1.1 药物和试剂 质粒抽提试剂盒(QIAGEN公司);pcDNA3.1-h5-HT1A受体质粒和pcDNA3.1-pCRE-luc质粒(Stratagene公司);Fugene HD转染试剂(Roche公司);8-OH-DPAT(Tocris公司);Forskolin(Sigma公司);Steady-glo(Promega公司)。……