张 艳，韩鹏黎，徐 霞，程旭芳，王 宁，戈士文

(1.河南省医药科学研究院，2.郑州大学药学院，3.河南省肝病药理重点实验室，河南郑州 450052)

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是临床上最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率逐年增长，已超过每年626万人，居于恶性肿瘤的第5位;每年死亡人数接近60万，位居肿瘤相关死亡的第 3位［1］。我国是肝癌的高发区，目前发病人数约占全球的55%，在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌，位居第二。现在临床上使用的化疗药物疗效均不理想，因此寻找高效低毒的抗肝癌药物迫在眉睫。

新型金属铜络合物(N-Cu)是由郑州大学化学系无机教研室合成的，它是以抗高血压药替米沙坦为配体，8个铜整合在一起的相对分子质量为8 723的大分子化合物。已有的试验资料显示［2－3］N-Cu对小鼠S180和H22均具有明显的抑制作用且毒性较低。本研究探讨N-Cu在体外对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用，为进一步开发NCu成为抗肝癌药物提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 细胞 人肝癌细胞株SMMC-7721购自中国科学院上海细胞库。

1.2 药品和试剂 RPMI1640培养液购自Solarbio公司;胎牛血清购自杭州四季青公司;DMSO和四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自美国Solarbio公司;顺铂注射液(DDP)，云南生物谷灯盏花药业有限公司，批号:20091205;Annexin-Ⅴ-FITC凋亡试剂盒购自美国BD公司;TRIzol购于英俊公司;RT-PCR试剂盒购于宝生物公司;PCR引物由宝生物公司合成;Bcl-2、Bax、Caspase-3、β-actin 抗体、山羊抗兔 I gG 均购于博奥森公司。

1.3 主要仪器 高速低温离心机(Biometra WT 16);PCR扩增仪(Biometra);酶标仪(Bio-Rad公司);凝胶成像分析系统(KODAK GEL-100);核酸蛋白分析仪(Eppendorf公司);DYY-6C型稳压稳流电泳仪(北京六一仪器厂);垂直电泳系统和电转系统(Bio-Rad公司170-3940);流式细胞仪(Beckman Coulter公司)。……