刘卫海，肖国丽，赖小平，赵爱国，2，3

(1.广州中医药大学新药开发研究中心，广东广州 510006;2.清远医药集团，广东清远 511518;3.东莞广州中医药大学中医药数理工程研究院，广东东莞 523808)

中药藤黄(gamboge)系藤黄科植物藤黄树(Garcinia hanburyiHook.F.G)所分泌的干燥树脂，近年来，藤黄的抗肿瘤作用受到高度关注。已有研究证实，新藤黄酸(neo-gambogic acid，NGA)为藤黄抗肿瘤作用的主要有效成分之一［1－3］。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一［4］，同时也是第三大引起患者死亡的肿瘤［5］。为此，本实验探讨了新藤黄酸诱导肝细胞癌HepG2细胞凋亡的作用机制，旨在为进一步开发新藤黄酸提供实验依据。

1 材料

1.1 实验药物与细胞株 新藤黄酸(NGA):亮黄色粉末，由广州中医药大学新药开发研究中心制备，纯度95.83%，批号20100304;人肝细胞癌HepG2细胞株:购自中国科学院细胞库，本实验室传代保存。

1.2 主要试剂 RPMI 1640培养基(美国Gibco公司);胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);AnnexinⅤ-FITC/PI apoptosis kit双染试剂盒、Cell cycle strain solution细胞周期检测试剂盒(联科生物公司)。

1.3 主要仪器 CO-150型二氧化碳培养箱(美国NBS公司);CKX-41-32型倒置显微镜(日本 OLYMPUS公司);FC500型流式细胞仪(美国贝克曼－库尔特公司，配有CXP2.0分析系统)。

2 方法

2.1 细胞培养及给药［6］人肝细胞癌HepG2细胞株培养于体积分数为0.10的胎牛血清的RPMI-1640培养基中，置37℃，5%CO2及饱和湿度的培养箱内，每24 h～48 h换液1次，常规消化传代，取对数生长期细胞进行各项实验。NGA溶于二甲基亚砜(DMSO)，给药时用生理盐水稀释至所需浓度，DMSO的终浓度小于0.001(体积分数);对照组给相应体积的溶媒，DMSO的终浓度为0.001(体积分数)。

2.2 流式细胞术检测细胞早期凋亡率及细胞周期 分别按AnnexinⅤ-FITC/PI apoptosis kit试剂盒说明书和Cell cycle strain solution细胞周期检测试剂盒说明书操作。……