张忠提，张雪，李瑞武

（中国医科大学1.口腔医学院干诊科；2.口腔医学院中心实验室；3.辽宁省口腔医学研究所；4.口腔医学院口腔颌面外科，沈阳110002）

牙髓干细胞（dental pulp stem cell，DPSC）在牙齿的修复再生研究中扮演重要角色［1］。Notch、Wnt等多种信号转导通路可调节DPSC的增殖及分化。其中Wnt信号通路在牙齿发育的信号调控和牙齿再生等医学工程研究中发挥重要作用。Wnt信号途径中的重要因子Wnt1、腺瘤样息肉蛋白（adenomatous polyposis coli，APC）、β-连环蛋白（β-catenin）可影响牙上皮和间充质的相互作用及牙本质与牙根的发育、增殖和分化［2］。我们前期实验［3］发现大鼠牙乳头细胞在体外与DPSC分层共培养可促进DPSC的增殖能力，为探讨这一生物学过程的细胞内分子机制，我们检测了牙乳头细胞和DPSC分层共培养后Wnt通路的表达情况。

本研究拟用原代培养大鼠DPSC与牙乳头细胞建立DPSC和牙乳头细胞的分层共培养体系，探讨牙乳头细胞对大鼠DPSC中Wnt信号分子表达的影响，为DPSC增殖方面的研究提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

Sprague-Dawley健康雄性4周龄大鼠和Sprague-Dawley出生后1 d大鼠，由中国医科大学实验动物中心提供。DMEM、胰蛋白酶、胎牛血清购自Gibco 公司；Wnt1、APC、β-catenin 一抗 购自 Santa Cruz公司。二抗购自北京中山生物技术公司。

1.2 方法

1.2.1 DPSC和牙乳头细胞分层共培养体系建立：参照文献［4，5］原代培养大鼠DPSC和牙乳头细胞，取对数生长期的细胞用于实验。PBS清洗3次，0.25%胰蛋白酶消化细胞，加入含血清培养基，将细胞从培养瓶壁上吹落并分散成单细胞悬液。将Transwell小室放入24孔板中，分层培养组下室接种DPSC，上室接种牙乳头细胞，培养基为10%胎牛血清的DMEM/F12，置于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。……