殷治华 赵富玺 穆雅琴 刘润花 王健 冯婷婷 齐彦

妊娠是极其复杂的生理过程，近代生殖免疫学研究认为，正常妊娠的维持有赖于母胎免疫耐受的形成［1］，一旦母胎免疫失衡，可能发生原因不明复发性流产(URSA)的病理妊娠。而调节性T细胞(Treg细胞)对于母体免疫耐受胎儿必不可少，是调控母胎免疫耐受形成的重要因素［2］。

在不明原因复发性流产的研究中，探讨Treg细胞中转录因子FoxP3对细胞因子受体表达调控的分子机制，我们是以孕鼠(流产模型和正常对照)脾脏淋巴细胞为研究对象的，我们可以通过CD荧光抗体标记后，再以免疫磁珠细胞分选法(MACS)或流式细胞分选法(FACS)获得Treg细胞。因此，建立有效的流产模型孕鼠脾脏淋巴细胞分离技术是进行这些研究的先决条件。本文采用免疫磁珠细胞分选法对流产模型孕鼠脾脏Treg细胞进行分离，并对流产模型孕鼠脾脏Treg细胞的纯度和活性及获得率进行分析。

1 材料和方法

1.1 研究对象 经与雄性DBA/2J孕鼠(购自北京华阜康公司)交配受孕的雌性CBA/J孕鼠(购自上海斯莱克公司)，饲养于山西大同大学免疫研究所动物室。

1.2 主要试剂 小鼠淋巴细胞分离液;红细胞裂解液;小鼠CD4+CD25+调节性T细胞磁珠分选试剂盒;大鼠抗小鼠CD4-FITC标记、大鼠抗小鼠CD25-PE标记的单克隆抗体，MS磁珠分选柱、LD磁珠分选柱。

1.3 主要仪器 流式细胞仪:美国BD FACS Calibur;超静工作台:新加坡ESCO;倒置显微镜:日本OLYMPUS CKX-31;二氧化碳恒温培养箱:国产上海博讯HH.CP-01A;低温冷冻台式离心机:国产湖南赛特湘仪TGL-20 m;免疫磁珠磁力架、MidiMACS分选器和MiniMACS分选器:德国MACS Miltnyi Biotec。……