夏龙飞 周 红 胡丽超 陈东东 解鸿翔 王 婷 穆 原

(江苏大学基础医学与医学技术学院，镇江212013)

抗磷脂综合征(Antiphospholipid syndrome，APS)是一种以体内持续存在抗磷脂抗体(Antiphospholipid antibody，aPL)、临床以动静脉血栓形成、习惯性流产等为主要特征的自身免疫性疾病［1］。本组前期研究及相关文献显示，β2糖蛋白Ⅰ (beta-2-glycoproteinⅠ，β2GPⅠ)与其相应抗体(anti-β2GPⅠ)复合物(anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ)能够刺激单核细胞、内皮细胞等表达组织因子(Tissue factor，TF)，从而导致血液高凝状态［2］。进一步研究发现细胞表面受体AnnexinA2(ANX2)及Toll样受体4(Tolllike receptor 4，TLR4)作为β2GPⅠ的共受体，能够介导抗 β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的激活［3-5］。众所周知，TLR4被其配体激活后，将招募并激活细胞内一系列信号蛋白，如丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases，MAPKs)，最终导致相关基因的转录，从而引起相关效应［6，7］。核因子 κB(Nuclear factor-kappa B，NF-κB)是一种广泛存在的核转录因子，可参与对多种基因的转录来调控相关效应。近年来有研究显示NF-κB在TLR4相关的信号通路中发挥重要作用。本文主要探讨NF-κB在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物刺激THP-1细胞诱导TF表达过程中是否被激活及其作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料及试剂 人单核细胞株THP-1(上海中国科学院细胞研究所)，RPMI1640(Gibco公司)，超级新生牛血清(Gibco公司)，兔抗人NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65单克隆抗体及兔抗人NF-κB抑制蛋白IκB-α多克隆抗体(Cell signaling公司)，鼠抗人β-actin抗体(Protein tech Group公司)，非特异性同型对照抗体R-IgG(武汉博士德生物工程有限公司)，Trizol(Invitrogen公司)，逆转录试剂盒(Toyobo公司)，TF活性试剂盒(Assaypro公司)，定量PCR试剂盒(杭州博日科技有限公司)，ECL显色试剂(GE Healthcare 公司)，LPS(Sigma 公司)，NF-κB抑制剂PDTC、p38抑制剂SB203580(Sigma公司)，ERK1/2抑制剂U0126(Promega公司)，JNK抑制剂SP600125(R＆D公司)，多克隆抗β2GPⅠ抗体和β2GPⅠ(本实验室制备)，引物(设计采用primer 5.0，由上海生物工程有限公司合成)，其他试剂均为国产分析纯。……