啮齿动物螺杆菌多重PCR检测方法的建立
2012-11-27李瑞娇谢建云胡建华
李瑞娇,冯 洁,谢建云,胡建华,高 诚
(1.东华大学化学化工与生物工程学院,上海 201620;
2.上海实验动物研究中心,上海市实验动物质量监督检验站,上海 201203)
啮齿动物螺杆菌(rodent Helicobacter)属革兰氏 阴性菌,通常寄居于啮齿动物消化道内,包括盲肠、结肠以及肝胆管系统[1]。自从1992年首次发现鼠型螺杆菌以来,目前已陆续分离到包括有肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus)、胆汁螺杆菌(Helicobacter bilis)、啮齿类螺杆菌(Helicobacter rodentium)在内的至少十三种啮齿动物螺杆菌[2]。啮齿动物螺杆菌的感染会严重影响实验动物的品质,其中肝螺杆菌可自然感染多个品系小鼠并直接导致急、慢性肝炎的产生,并对 A/JCr小鼠肝癌发生有促进作用[3],胆汁螺杆菌则易引起各种肠炎疾病,并与肝炎发生相关,例如多灶慢性肝炎[4],而感染啮齿类螺杆菌也会导致小鼠肝炎、盲肠结肠炎等多种肠肝疾病,另外胆汁螺杆菌与啮齿类螺杆菌的同时存在,会引起SCID小鼠腹泻[5]。因此,若误将感染螺杆菌的动物用于科研或生物安全性评价等试验中,较易引起实验数据混乱,对结果产生较为严重的干扰,甚至引发更严重的后果[2]。
啮齿动物螺杆菌的诊断检测,目前有很多种方法,包括传统的分离培养法、ELASA、PCR 等[6,7]。PCR诊断是螺杆菌分子诊断最优势的方法,其因快速、敏感、特异等优点而得到广泛的应用,主要有普通 PCR、巢式 PCR、多重 PCR、荧光核酸酶 PCR等[8]。多重PCR是以普通 PCR反应体系为基础,但升级为同时加入多对引物,同时扩增出多条目的片段,以达到同时检测多种病原体,快速、高效的新型方法[9]。……
