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仙台病毒RT-PCR检测方法的建立及灰仓鼠中流行情况调查

2012-11-27李晓波冯育芳岳秉飞贺争鸣

中国比较医学杂志 2012年12期
关键词:小鼠实验检测

李晓波,付 瑞,王 吉,卫 礼,邢 进,冯育芳,岳秉飞,贺争鸣

(中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所,北京 100050)

仙台病毒属于副粘病毒科,副粘病毒属,核酸型为单股负链 RNA,基因组全长 15 384 bp[1],编码6 个结构蛋白(L,P,NP,HN,F,M)和一个非结构蛋白C,其基因排序次序为:3'-Leader-NP-P+C-M-FHN-L-Leader-5'[2]。仙台病毒传染性强,容易扩散,是啮齿类实验动物最难控制的病毒之一。啮齿类实验动物感染SeV会对其免疫系统、致瘤作用及繁殖等产生影响,从而影响实验结果[3],动物一旦感染很难清除,严重影响幼鼠生长发育并降低成年鼠的繁殖率[4]。

现有的实验动物种属和品系已越来越不能满足科学快速发展的要求,迫切需要开发更多适应不同要求的新型实验动物,灰仓鼠(Cricetulus migratorius)就是在包虫病研究中筛选出来的一种鼠类。灰仓鼠属于啮齿目,仓鼠科,仓鼠亚科,仓鼠属。广泛分布于中亚地区,栖息生境从荒漠平原至海拔3 000 m以上的高山草甸均有分布。已查明该鼠在自然界参与土拉伦、森林脑炎、鼠疫等多种自然疫源性疾病传播[5,6],并且对仙台病毒易感。目前我国还没有关于灰仓鼠仙台病毒感染的报道,也没有可用于灰仓鼠SV的检测方法。我们针对仙台病毒L基因设计引物,建立了仙台病毒 RT-PCR检测方法,并对60只采自我国新疆地区的灰仓鼠,进行SV感染的检测。

1 材料

1.1 试剂

AMV逆转录酶、随机引物购自 Promega公司;RNA酶抑制剂购自庄盟公司;Taq Hs DNA酶、dNTP、100 bp DNA marker购自宝生物工程(大连)有限公司,RNA提取试剂盒购自Qiagen公司。

1.2 病毒毒株及疫苗

仙台病毒、猴副流感病毒(SV5)、犬瘟热病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型均为本实验室保存。……

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