侯 波

（吉林省人民医院 急诊外科，吉林 长春130021）

血管紧张素原（angiotensinogen，AGT）作为肾素－血管紧张素系统中的第一步限速反应的底物，不仅在调节血压和稳定体液平衡方面发挥着极为重要的作用，而且能够抑制肿瘤细胞增殖、迁移和肿瘤血管的形成［1］。位于AGT基因第2外显子的T→C错义突变导致编码产物第235号氨基酸的转变：甲硫氨酸（Met）→苏氨酸（Thr）。以往多项研究调查了AGT基因M235T多态性与多种肿瘤易感性的关系［2－6］。然而，其与中国人群结直肠癌的相关性尚未见报道。本研究采用病例－对照研究分析了AGT基因M235T多态性与中国人群结直肠癌的相关性，旨在寻求新的结直肠癌分子遗传学标记物，为揭示其发病机理提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选自入住我院普外科结直肠癌患者151例，男性90例，女性61例，平均年龄59.7（±13.4）岁。所有病例均经组织病理学确诊，其中高中分化87例，低分化64例；临床Ⅰ－Ⅱ期86例，临床Ⅲ－Ⅳ期65例；有远处转移87例，无转移64例。对照组选自我院健康体检中心，共202例，男性128例，女性74例，平均年龄57.3（±11.5）岁，无肿瘤家族史，各项体检指标均正常。所有入选对象均为无血缘关系汉族个体。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取及引物合成 采集入选对象者外周静脉血3ml，按照北京百泰克生物科技公司全血基因组DNA提取试剂盒操作说明提取DNA。参照文献［7］设计引物，上游引物：5’－CAGGGTGC TGTCCACACTGGACCCC－3’，下游引物：5’－CCGTTTGTGCAGGGCCTGGCTCTCT－3’。引物由上海英骏生物技术有限公司合成。

1.2.2 PCR扩增 PCR 反应体系为25μl，含10×反应缓冲液3.0μl，dNTP 2.5μl，MgCl21.5μl，上、下游引物各0.25μl，TaqDNA 聚合酶1.0U，基因组DNA 1.5μl，用无菌去离子水补足至25μl。

在PCR扩增仪（Eppendorf 5331，德国）上按以下条件进行循环反应：94℃预变性4min；……