赵晓苗，赵一凡，赵宇正，赵炜疆，唐雪莲，谢梅青＊

（1.中山大学孙逸仙纪念医院a.妇产科；b.麻醉科，广东 广州510120；2.肇庆市第一人民医院；3.汕头医学院神经科学中心；4.深圳市妇儿医院）

多聚酶链反应－限制性片段长度多态性 （Polymerase－chain reaction－restriction fragment length Polymorphism，PCR－RFLP）是传统的检验基因多态性的方法，根据酶切图谱判断基因型［］。变性高效液相色谱（Denaturing High Performance Liquid Chromatography，DHPLC）是一种基于 WAVE系统分析的新高通量筛选DNA序列变异的技术，原理是用离子对反向高效液相色谱法分离并检测异源双链，目前已用于基因序列的比较、人类基因多态性及疾病相关性的研究［2］。本研究采用RFLP和DHPLC分析儿茶酚O－甲基转移酶 （catachol－O－methyltransferase，COMT）基因的第4号外显子第158位密码子G／A的多态性，并结合DNA测序法比较两种方法的可行度、可信度和优缺点。

1 材料和方法

1.1 研究对象 病例组选择1999年11月－2004年11月收治我科经病理确诊的50例子宫内膜癌患者，其中18例收集蜡块包埋组织，32例抽取全血；对照组选择同期收治经病理确诊子宫脱垂并排除其他妇科疾病的患者，其中31例蜡块包埋组织，19例抽取全血。两组病人均大于40岁，为我国汉族人，被抽取血标本的患者全部知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 DNA 的制备：① 采用无菌ddH《》2O 和PBS液提取白细胞后，用DNA提取液（达安基因公司提供）提取全血基因组DNA。②蜡块包埋组织的DNA提取：切取8μm蜡块切片8张，二甲苯脱蜡，TE9提取液消化，等体积酚－氯仿溶液抽提3次，无水乙醇沉淀DNA。TE9提取液制备：500mmol／L Tris，20mmol／L EDTA，10mmol／L NaCL，1%SDS，500μg／ml蛋白酶 K，PH8.0。

1.2.2 PCR扩增：参照文献［3］设计引物，为使两条引物的Tm值更接近，在前引物5’端置换1个碱基。序列为5’－TGCTGTGGCTACTCAGCTGTG－3’，5’－TGAACGTGGTGTGAACACCTG－3’。 反应体系为……