人骨髓间充质干细胞在体内向造血细胞分化的研究

2012-11-24马洪喜韩秀丽张福明

中国实验诊断学 2012年11期

关键词：检测

陈晓，马洪喜，李丹，韩秀丽，张福明，白欧＊

（吉林大学第一医院1.肿瘤中心；2.临床病理诊断中心，吉林长春130021）

骨髓中主要存在两种干细胞：造血干细胞（HSC）和间充质干细胞（MSC），后者是具有多向分化潜能的干细胞，能分化为神经细胞、成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、肌细胞等［1］。它们均起源于中胚层细胞，MSC能否向造血干／祖细胞分化，在胚胎造血组织发生的研究过程中，不排除由正处于分化中及分化程度很低的幼稚MSC在一定的微环境的调控下向多能造血干细胞分化［2］。目前有关MSC向造血分化的研究相对较少，本实验首先建立人骨髓MSC分离、培养及扩增体系，以hMSC注射于亚致死剂量射线照射后的裸鼠，观察hMSC体内造血分化潜能和造血重建能力，为hMSC作为干细胞移植供体来源的可能性和干细胞横向发育的研究提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

取本院肿瘤中心健康志愿者骨髓，DMEM－LG、DMEM－HG、胎牛血清（FBS）、Percoll分离液（Phamacia），CD45－FITC、CD34－PE、CD29－PE、CD44－PE、CD90－FITC、CD105－PE（BD），BALB／C－nu／nu裸鼠，6－8周龄，体重18－20g，雌性，购自中科院上海实验动物中心。

1.2 人骨髓间充质干细胞的分离、培养、扩增和鉴定

将无菌肝素化骨髓制备成单个核细胞（MNC），以1×106／ml的密度接种于培养皿中，置37℃、5%CO2、100%饱和湿度的培养箱中培养，当细胞生长融合达90%时，用0.25%胰蛋白酶－0.02%EDTA消化传代，传至第4代（P4）后进行实验。取P5代细胞，消化洗涤后制成1.0×106／ml的单细胞悬液，分别加入抗CD34、CD45、CD29、CD44、CD90、CD105单克隆抗体，FACS检测MSC表面抗原表达。