王 磊，程鹤香，赵 倩，陈 鸥，赵 明＊

（1.吉林大学第二医院 耳鼻咽喉科，吉林 长春130041；2.佳木斯市中心医院 耳鼻咽喉科）

喉癌是东北的高发癌症之一，其主要的治疗方法主要是手术、放化疗等。其病因主要与吸烟相关，可能的机制是吸烟产生的毒性致癌物质导致的线粒体DNA损伤所致。近年研究发现在许多人类肿瘤中有大量的线粒体基因组缺陷，线粒体基因组改变的频率非常高，包括膀胱、头颈、肺和乳腺、前列腺肿瘤等。体细胞线粒体DNA突变被认为是肿瘤早期发生的标志。线粒体DNA突变是否参与肿瘤形成及寻找线粒体中的体细胞突变是目前肿瘤研究的热点［1－3，14］。

研究喉癌的线粒体功能和突变，需要有喉癌细胞的线粒体缺失细胞，由于线粒体缺失细胞系的构建非常困难，所以一直以来人们利用1989年由Attardi构建的无线粒体的骨肉瘤细胞系进行线粒体功能研究，但是不同种类的细胞结构，生长，分化突变特点等均有特异性，如果进行喉癌线粒体功能的研究，能有线粒体DNA缺失的人喉癌细胞系，是非常重要的［4－7］。我们构建线粒体缺失的喉癌细胞，为后续构建融合喉癌细胞、线粒体突变和线粒体功能研究提供细胞模型，同时也为研究线粒体DNA突变和喉癌发生之间的关系奠定了基础。

本实验采用人稳定传代喉癌细胞系JHUo11作为母本细胞，通过低剂量溴化乙锭持续作用于该细胞，诱导线粒体缺失DNA，成功制备出ρ0（无线粒体）细胞。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

RPMI1640培养基、胎牛血清购自美国 Hyclone公司；……