杨 阳，马 嵘，张 远，刘郁东，汪 敏，孙圣刚，黎 钢＊

（1.华中科技大学同济医学院附属协和医院 神经内科，湖北 武汉430022；2.华中科技大学同济医学院药理学系，湖北 武汉430030）

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是一种渐进性大脑退行性病变，是最常见的成年痴呆类型，其发病率随年龄增长逐渐升高。迄今确切的病因与发病机制尚未充分阐明，尚无有效的根治良策。近年来神经鞘脂代谢异常与β淀粉样蛋白（amyloid beta－protein，Aβ）的神经毒性作用受到诸多研究者的关注［1－3］。神经鞘脂代谢物包括神经酰胺（ceramide，Cer）、鞘氨醇（sphingosine，Sph）、1－磷酸鞘氨醇（sphingosine 1＿phospate，S1p）等多种代谢产物，目前证明这些代谢产物参与细胞增殖与凋亡的调控。Cer和Sph是细胞增殖的负调控因子，能够抑制细胞生长促进细胞凋亡；而进一步的代谢产物S1p则刺激细胞生长，抑制细胞凋亡［4］。有人将Cer、Sph和S1p称为“鞘磷脂变阻器”，SPK是“鞘磷脂变阻器”的关键调节因子，SPK将Sph转化为S1p。国外研究发现，Aβ25－35诱导SH－SY5Y细胞凋亡过程中SPK1活性减低，提示其活性下降参与AD的发病机制，体外高表达SPK1能否减轻Aβ对神经元的损伤值得进一步研究。腺病毒表达载体是目前重要的转基因病毒载体，可以高效介导基因体内外转移。鉴此，我们成功构建了Ad－CMV－SPK1，本文主要研究Ad－CMV－EGFP对N2a细胞感染的量效与时程变化，以及Ad－CMV－SPK1在N2a细胞中的表达情况，为进一步研究SPK1的生物学功能提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 材料携带人SPK野生型基因pcDNA3＊SPKWT（FLAG）质粒由军事医学科学院放射医学研究所段海峰老师惠赠；N2a细胞由本实验室保存；高糖DMEM培养基和OPTI－MEM培养基以及胎牛血清均购自GIBCO公司；……