河北省秦皇岛市第一医院神经外科二病区 （秦皇岛066000）

吴 磊 赵建华 冯 继

骨髓间充质干细胞（Bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）具有向神经细胞、肌细胞、骨和软骨细胞等多种组织分化的潜能［1］，被多个学科争先进行研究，但到目前为止，仍有很多领域存在尚未解决的问题，严重限制了其广泛的临床应用。作为干细胞，其自我更新和不断增殖潜能使其有可能存在类似于肿瘤细胞的增殖特征，特别是长期体外培养的干细胞可能发生异质性问题，这一问题已被少数研究机构报道［2，3］，但结论不一而足。本研究以此为着眼点予以研究。

材料和方法

1 材 料 实验使用的DMEM培养基和胰蛋白酶均由美国Gibco公司生产，而胎牛血清为中科院血研所生产，FITC标记CD29、CD34抗体购自英国Serotec公司，CD31、CD45、CD71、CD90抗体购自美国Santa Cr uz公司，低熔点琼脂糖、台盼兰购自北京鼎国公司；鼠源性C6恶性胶质瘤细胞系由天津市神经病学研究所神经肿瘤实验室提供；清洁级Sprague-Dawley大鼠购自中国军事医学科学院动物中心。

2 大鼠源性BMSCs的分离及常规培养 用贴壁培养法分离BMSCs.即将Sprague-Dawley大鼠通过拉颈手法将其处死，然后使用75%酒精浸泡充分消毒；将Sprague-Dawley大鼠的双侧股骨和胫骨仔细分离，并剪开其长骨两端的骨皮质，将含10%FBS的DMEM培养基抽取到注射器中，通过注射器将培养基反复冲洗该鼠的骨髓腔，收取实验所需的细胞悬液，将其接种到塑料培养皿或者培养瓶中，在37℃、5%CO2饱和湿度条件下使用细胞培养箱对其进行培养。等到部分细胞贴壁后对其进行半量换液，第3d实行全量换液，第2代起每3～5d胰酶消化传代，获取长期传代培养细胞。……