陈丽萍 兆丰华生物科技（福州）有限公司 福州 350014

塞尼卡病毒A（Senecavirus A，SVA），原名塞尼卡谷病毒（Seneca valley virus，SVV）是引发猪原发性水疱病（PIVD）的主要原因，可导致感染猪的鼻吻、蹄冠部出现水疱性病变，新生仔猪死亡。近年来，SVA已经波及美国、加拿大、巴西、泰国、中国等，危害养猪业健康发展[1-6]。目前，国内外仍没有可以推广使用的商品化SVA疫苗，疫苗制备方法的报道最早出自中国农业科学院兰州兽医研究所[7]。本文通过试验从接种方法、细胞浓度、血清含量及收毒时间等因素对SVA在BHK-21细胞中培养的影响，从而了解SVA在BHK-21细胞中增殖的最适条件，为疫苗生产提供数据参考。

1 试验材料

1.1 仪器设备 细胞培养瓶，CO2培养箱，倒置显微镜，恒温水浴锅，96孔板。

1.2 试验试剂MEM培养基（购自Gibco），新生牛血清（购自润生生物），BHK-21细胞，SVA（公司自主分离毒株），胰酶-EDTA溶液（自配）。

2 试验方法

2.1 两种接种方法对比试验 用MEM培养基(含8%新生牛血清)作为BHK-21细胞的营养液，按常规方法培养细胞[8]。将长满致密单层的BHK-21细胞用胰酶-EDTA消化传代（比例为1:3），随机将细胞分成2组，一组同步接种1% SVA；另一组待细胞生长约90%时，弃去营养液，异步接种1% SVA，加入MEM维持液（含2%新生牛血清）；设健康细胞作对照。接毒后细胞放37℃、5% CO2培养箱中培养。培养12 h后每3 h观察一次，18 h后每3 h、每组随机收获2瓶，直至30 h，收获后反复冻融2次，测定TCID50。

2.2 不同细胞浓度培养同时收获对比试验 将长满致密单层的BHK-21细胞消化后，按1:2、1:3、1:4和1:5的比例稀释传代，待细胞生长至90%时，弃去营养液，加入MEM维持液，接种1%SVA；设健康细胞作对照。接毒24 h后同时收获细胞，反复冻融2次后测定TCID50。……