氨氯地平对ox-LDL诱导人单核巨噬细胞MMP-9表达的影响1)
2012-11-22宋海彬申晓彧
宋海彬,高 振,申晓彧
冠状动脉粥样硬化斑块由稳定转为不稳定,继而破裂导致血栓形成,是急性冠脉综合征(ACS)最主要的发病机制[1]。基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)是 MMPs家族中的重要成员,是细胞外基质(extracellular matrix,ECM)代谢的关键酶之一,在动脉粥样斑块处的血管重构、斑块的不稳定及破裂诱发的ACS中都起着十分重要的作用[2]。
氨氯地平(Amlodipine)是广泛用于临床的第三代新型长效二氢吡啶类钙通道阻滞剂(calcium channel blockers,CCB),临床上主要应用于高血压治疗的一线用药。
1 材料与方法
1.1 研究对象 健康成人静脉血液来自山西医科大学第二临床医院体检中心;人淋巴细胞分离液(Lymphocytes Separation Medium1077)为上海华精生物高科技有限公司产品;RPMI-1640培养液;胎牛血清为杭州四季青公司产品;佛波酯购自美国SIGMA公司;氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)为北京协生生物科技有限公司产品;FITC-CD14抗体购自日本Beckman Coulter公司。RNA提取试剂盒(TransZol)购自北京全式金生物技术公司;逆转录-多聚酶联反应(RT-PCR)试剂盒购自北京全式金生物技术公司;引物序列由上海生工生物有限公司合成;酶联免疫(ELISA)试剂盒购自美国R&D公司;氨氯地平为辉瑞公司馈赠。
1.2 巨噬细胞分离、培养、诱导和鉴定 取肝素抗凝静脉血30 mL分装到10个离心管,用RPMI-1640液稀释1倍并充分混匀,分别缓慢加入等比例淋巴细胞分离液于离心管中,2 000 r/min离心20min后,吸取中间环状云雾状淋巴细胞层,再以3 mLPBS液充分混匀,1 500r/min离心洗涤2次;用含10%胎牛血清的RPMI-1640各5mL将细胞吹开混匀,取细胞悬液至培养瓶,每瓶4mL,于37℃、5%CO2培养箱中孵育,培养至4代后于细胞指数生长期进行诱导转化实验。……
