焦华琛，张蕴慧，李运伦，郭 丽，姜月华，孟凡波，杨金果，杜雪翠

房颤的发生与炎症关系密切。青蒿是传统抗疟疾中药，现代药理研究证实，青蒿提取物具有明确的抗心律失常作用。为探讨青蒿抗心律失常的作用机制，本实验观察了青蒿提取物青蒿总酯对房颤大鼠心肌炎症相关因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的影响。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 清洁级SD雄性大鼠购自山东中医药大学实验动物中心，体重250g±20g，遵循国家实验动物管理条例及国家实验动物管理实施细则，合格证号3CX1＜鲁＞2009001；青蒿总酯由西安小草植物科技有限责任公司生产，批号SC101213；卡托普利由广州白云山制药厂生产，批号110754。戊巴比妥钠由上海华蓝化学科技有限公司进口分装，批号57330。

1.2 方法

1.2.1 房颤模型建立及分组 SD大鼠60只，分为对照组（15只）、模型组（15只）、青蒿组（15只）、卡托普利组（15只）。模型组、青蒿组、卡托普利组大鼠采用氯化钙、乙酰胆碱混合液以舌下静脉给药的方式建立房颤动物模型。用1%的戊巴比妥钠进行腹腔注射麻醉，先描记大鼠正常心电图。舌下静脉注射氯化钙、乙酰胆碱混合液1mL／kg，描记心电图，待出现典型房颤f波。以上程序隔日重复1次，连续4周，停药后心电图仍有典型房颤改变为造模成功。

模型组、青蒿组、卡托普利组大鼠均按此方法每日给药，常规喂养。实验前2周青蒿组以1.25g／kg灌胃。卡托普利组以3.25mg／kg灌胃。

1.2.2 TNF-α与ICAM-1测定 实验当日，取动物静脉血，尽快注入硅化玻璃试管内，4℃、3 000r／min离心10min，吸取上清液，保存待测。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定，TNF-α及ICAM-1试剂盒由上海宝特生命科学发展有限公司进口分装。酶标仪测OD值，计算样品中TNF-α、ICAM-1浓度。

1.3 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示。多组间均数比较采用方差分析（比较采用t检验）。

2 结 果

模型组血清TNF-α、ICAM-1水平较对照组有显著提高（P＜0.05）。在降低TNF-α、ICAM-1表达方面，卡托普利组的作用最为显著，青蒿组的作用略差于卡托普利组（P＞0.05）。详见表1。

表1 各组血清TNF-α及ICAM-1水平比较（x±s） μg／L

3 讨 论

TNF-α主要由单核巨噬细胞产生，中性粒细胞、星状细胞、内皮细胞、平滑肌细胞亦可产生TNF-α。它能够损伤内皮细胞，促进凝血，抑制纤溶，促进单核细胞对内皮细胞黏附以及促进血管平滑肌细胞迁移、增殖。TNF-α不仅可以作为宿主的防御、免疫以及内环境稳定等生理过程的介质，还是感染、炎症及损伤的病理因子，因此除肿瘤疾病之外的许多损伤性疾病中，血浆中TNF-α的升高也有意义。TNF-α持续灌注大鼠心脏可致大鼠心腔扩大［1］，TNF-α过度表达的转基因小鼠存在显著的心房纤维化及较高的房性心律失常发生率［2］，而抗TNF-α治疗可阻止心腔扩大改善间质胶原重构，减轻心肌纤维化［3］。研究显示TNF-α与心肌重构密切相关。风湿性心脏病持续性房颤组心房组织中TNF-α基因转录水平和蛋白表达水平较窦性心律组、阵发性房颤组均显著增加［4］，TNF-α的蛋白水平与左房内径、房颤持续时间呈明显正相关。持续性房颤患者TNF-α的高表达可能是影响胶原代谢，参与心房间质纤维化的重要因素之一，与房颤的发生和维持有关。

细胞黏附分子（cell adhesion molecule，CAM）是存在于细胞表面的一类糖蛋白受体，主要功能为促进细胞与细胞及组织基质间的黏附，对循环血液中的白细胞黏附、游出及浸润起主要作用。它在维护正常组织的稳定，介导炎症反应，血栓形成，损伤修复及免疫调节中起重要作用。CAM的种类繁多，作用非常广泛，可以分为以下4类：免疫球蛋白超家族（Immunoglobulin super family）、整联蛋白（Intergrin）、选择素 （Selectin）及其他。血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）属于免疫球蛋白超家族。当内皮功能不全时，VCAM-1等黏附分子使单核细胞和中性粒细胞活化并黏附到内皮细胞表面。活化的单核细胞和中性粒细胞通过释放某些毒性产物，可导致局部炎症反应。这些黏附分子通过促进炎症细胞与内皮细胞相互作用而介导组织损伤，因此对房颤的发生发展可能起到一定作用。

TNF-α与ICAM-1都属于炎症相关因子。在本实验中，模型组TNF-α、ICAM-1的表达均较对照组高，证明在房颤过程中，这两项指标是升高的。青蒿提取物与卡托普利一样，能明确降低模型大鼠的TNF-α与ICAM-1水平，通过这一途径改善心律失常。由此推测中药青蒿抗心律失常的机制可能有以下几方面：心肌细胞和间质的炎症反应可直接导致膜电位变化；TNF-α、ICAM-1可导致心肌结构重构和电重构，导致交感神经密度增高，损伤细胞膜，诱发心律失常；通过抑制炎症因子TNF-α抑制心脏结构重构和电重构，减少心律失常的发生；通过抑制ICAM-1表达，减少动脉粥样斑块形成，稳定斑块，减少心律失常的发生。

［1］ Bozkurt B，Kribbs SB，Clubb FJ，et al.Pathophysiologically relevant concentrations of tumor necrosis factor-αpromote progressive left ventricular dysfunction and remodeling in rats［J］.Circulation，1998，97：1382-1385.

［2］ Saba S，Janczewski AM，Baker LC，et al.Atrial contractile dysfunction，fibrosis and arrhythmias in a mouse model of cardiomyopathy secondary to cardiac-specific overexpression of tumor necrosis factor-α［J］.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2005，289：H1456-H1457.

［3］ Gurantz D，Yndestad A，Halvorsen B，et al.Etanercept or intravenous immunoglobulin attenuates expression of genes involved in postmyocardial infarction remodeling［J］.Cardiovasc Res，2005，67：106-108.

［4］ 袁宇.风湿性心脏病心房颤动患者血清肿瘤坏死因子的变化及其与心功能的关系［J］.新乡医学院学报，2008，25（6）：581-582.