任 蓉，高卓平，赵继元

(1.西安市交通大学附属广仁医院耳鼻喉头颈外科；2.西安交通大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科，陕西 西安 710004)

46例甲状腺乳头状癌中甲状腺素受体β1表达的意义

任 蓉1，高卓平1，赵继元2

(1.西安市交通大学附属广仁医院耳鼻喉头颈外科；2.西安交通大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科，陕西 西安 710004)

目的研究TRβ1在PTC标本中的表达及其与PTC临床特征之间的关系；初步探讨TRβ1在PTC发生发展以及侵袭转移过程中的作用及其可能的机制，对PTC分子靶向治疗中靶点的选择提供理论和实验依据。方法通过免疫组化染色检测TRβ1在46例PTC组织中的表达，观察其差异，并分析其与患者临床资料中的性别、年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、包膜浸润及TNM分期之间的关系。结果PTC组织中的TRβ1表达阳性率高于癌旁组织(χ2=4.423，P=0.035)及正常组织(P<0.05)。TRβ1在PTC组织中的表达与患者性别及年龄无明显相关性(P>0.05)；与肿瘤直径、淋巴结转移、包膜浸润以及TNM临床分期存在明显相关，转移组中TRβ1表达率明显高于非转移组(P<0.05)。结论研究结果提示TRβ1有可能成为判断PTC预后及复发的指标。

甲状腺激素受体；甲状腺乳头状癌

甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma，PTC)是近些年来最常见的临床甲状腺恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的4%[1]，近些年来PTC的发病率呈明显的上升趋势，大约已占甲状腺癌的60～70%。甲状腺乳头状癌的特点是：发生转移较早，同时PTC具有较高转移率。有临床研究发现：在很多已经发生颈部淋巴结转移的患者中有许多还并不能触及甲状腺癌原发灶。但是有时转移病灶生长缓慢，统计显示有时肿瘤出现囊性改变，与颈部淋巴结核、囊性纤维瘤、淋巴结炎或各种囊肿样病变很难区分，对诊断PTC术后转移复发带来了难度[5]。因此进一步研究PTC侵袭转移的分子机制并探讨针对PTC转移的治疗策略对提高PTC患者的生存率，改善PTC的疗效均具有积极的意义。综上所述，本研究的目的是检测46例PTC和21例甲状腺良性病变在免疫组织化学中TRβ1；评价TRβ1在协助判断PTC预后中的临床应用价值；探讨TRβ1与PTC转移的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本研究的病例及标本来源于西安市第四医院、西安交通大学第一附属医院以及西安交通大学第二附属医院耳鼻喉-头颈外科2007-10～2010-10收治的46例PTC患者，其中男性19例，女性27例，年龄29～63岁，平均年龄为46.2±6.3岁。所有病例均为首次治疗，术前均未行化疗、放疗等抗癌治疗，并有相应完整的档案(包括临床分期、病理分级和随访资料)。46例PTC患者TNM临床分期情况：Ⅰ期10例，Ⅱ期19例，Ⅲ期15例，Ⅳ期2例。对照组：收集同期21例非癌性甲状腺结节旁正常甲状腺组织(以下简称正常甲状腺组织)，与上述46例PTC病例在年龄、性别等方面无明显差异。

1.2 方法

1.2.1 取材 详细描述并记录切除的原发性甲状腺乳头状癌标本的大体情况，并选出癌巢大、坏死少的PTC、癌旁甲状腺组织及正常甲状腺组织做为实验标本。

1.2.2 制作石蜡切片

1.2.3 免疫组化结果判断标准

TRβ1在PTC组织中的阳性表达部位位于肿瘤细胞胞核，阳性染色为淡黄色、棕黄色或棕褐色，呈颗粒状或团块状。所有切片均分别采用盲法阅片，由2名资深病理科医生完成，当结果不一致时，进行协商并统一判定，最终结果以细胞核或胞质呈棕黄(褐)色为阳性，每张切片在高倍镜视野下计数细胞，先按染色强度打分：0分为无色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色，染色强度需与背景着色相对比；再按阳性细胞所占百分比打分：0分为阴性，1分为阳性细胞≤10%，2分为11%～50%，3分为51%～75%，4分为>75%。染色强度与阳性细胞百分比的乘积≥2分为免疫反应阳性(+)。

1.2.4 统计学分析

TRβ1蛋白在PTC组织及癌旁甲状腺组织、正常甲状腺组织中表达差异的比较采用列联表χ2检验；统计所收集原发性甲状腺乳头状癌患者临床资料中的性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期等指标，采用SPSS17.0统计软件对实验结果数据进行分析。计数资料采用均值±标准差表示，使用t检验分析组间差异；TRβ1与临床病理指标关系研究根据不同的临床指标数据分别采用卡方检验。并采用趋势卡方检验对各组TRβ1阳性表达率进行趋势检验。分别列出χ2值、P值，P<0.05被认为有统计学意义。

2 结果

2.1 TRβ1在PTC、PTC癌旁及正常甲状腺组织中的表达

46例PTC组织中TRβ1阳性表达率54.35%(25/46)，癌旁甲状腺组织中阳性表达率32.61%(15/46)，正常甲状腺组织中的阳性率仅28.57%(6/21)。经卡方检验，TRβ1表达阳性率PTC组织高于癌旁组织(χ2=4.423，P=0.035)；PTC组织高于正常组织(P<0.05)。(见图1)

图1 TRβ1在PTC、PTC癌旁及正常甲状腺组织中的表达(*P<0.05)

2.2 TRβ1表达与PTC临床病理指标关系

TRβ1蛋白在PTC组织中的表达与患者的性别及年龄无明显相关性(P>0.05)；与肿瘤直径、淋巴结转移、包膜浸润以及TNM临床分期存在明显相关，转移组中TRβ1的表达明显高于非转移组(P<0.05)。(见表1)

表1 TRβ1在PTC标本中的表达与临床指标的关系

2.3 TRβ1表达免疫组化图(见图1)

图1 不同组织中TRβ1表达情况

A：TRβ1在PTC中的强阳性表达(SP×200)

B：TRβ1在PTC中的阳性表达位于癌细胞核，呈棕黄色颗粒状。(SP×400)

C：TRβ1在正常甲状腺组织中的阴性表达(SP×200)

D：TRβ1在正常甲状腺组织中的阴性表达(SP×100)

3 讨论

PTC是人类头颈部疾病中的常见病和多发病，而PTC则是甲状腺恶性肿瘤中最常见的一种，在临床所有的内分泌肿瘤中，PTC也是最常见的恶性肿瘤之一，PTC约占内分泌恶性肿瘤的91.5%，而最常见的甲状腺恶性肿瘤就是甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)。“具有明确的滤泡细胞分化，典型的乳头及滤泡结构，特征性胞核改变的甲状腺恶性上皮肿瘤”是世界卫生组织肿瘤学分类对甲状腺乳头状癌的定义。其中定义关于“细胞核具有粗大的乳头及特征性细长分枝的标志性形态，并包括核沟、核内包涵体、毛玻璃样核，并且细胞核同时具有程度不同的异型性”是典型的PTC标志性乳头状结构。对甲状腺癌如果能够做到早期、正确诊断，同时给予积极手术治疗，则就可最大可能的改善甲状腺癌患者现有的生存率，使其生存时间达到延长的目的[2]。甲状腺乳头状癌的一大显著特点为早期即易发生转移[3]，尽管目前乳头状癌的患者术后恢复情况较好，总体生存率高于其他常见恶性肿瘤，但仍有研究显示发生转移的PTC患者预后比未发生者差[4]，有报道，甲状腺癌诊为良性结节切除后残癌率为50～70%。

甲状腺癌患者多手术切除大部甲状腺腺体，其甲状腺功能受到影响，故服用甲状腺素多需终身伴随，才可维持正常体内的甲状腺素水平，而不影响患者身体机能。而甲状腺素对肿瘤的影响近年已有文献报道，甲状腺素可能对肿瘤具有促进作用。Cristofanilli等[6]发现，原发性甲状腺功能低下的女性患乳腺癌的风险明显下降，这些数据表明，甲状腺激素的生物学作用可能为乳腺癌的一个重要病因。但并非所有的临床流行病学研究都与这一结论一致，Robert等[7]通过研究发现，甲状腺功能低下反而对肝癌是一个危险因素，这提示甲状腺素在不同的肿瘤中可能发挥的功能也不尽相同。Liu等[8]的研究表明，三碘甲状腺原氨酸(T3)可以促进乳腺癌细胞增殖，并可在一些乳腺癌细胞株中协同E2促细胞增殖的作用，这是甲状腺素促进肿瘤发展的直接证据。这些研究对肿瘤的预防和治疗研究领域提供新的思路。甲状腺素进入细胞后发挥一系列的生物学功能与细胞内的甲状腺素受体(Thyroid hormone receptors，TRs)关系密切，因此细胞内TRs的表达水平在细胞对甲状腺素应答中具有重要的作用。有研究显示，在一部分乳腺癌患者的肿瘤组织中TRs出现异常的表达，特别是TRβ1的阳性率明显高于正常组织，表明TRβ1可能会在肿瘤的发生及发展中均发挥了重要的作用。

甲状腺激素(T3)是一种调节细胞生长、发育和分化的重要激素，它的调节作用主要需依赖与TRs相结合才能发挥作用[9]。尽管甲状腺激素很早即已被发现，但TRs的研究相对则滞后了许多。直到1986年，Weinberger等[10]首次成功克隆出TRs的cDNA，目前已知当时获得的基因为TRβ1，位于人染色体3p24.1，编码TR-β多个亚型蛋白。研究人员随后进一步使用Northernblot方法以TRβ1基因为探针检测了多种正常组织，发现TRβ1基因在正常组织中广泛表达。随后有学者以TRβ1基因cDNA为探针，对多种肿瘤细胞系及原发性肿瘤TRβ1基因mRNA的表达进行检测，结果表明该基因在多种肿瘤中表达发生改变。这一发现为TRs的研究展开了一个广阔的前景。

有研究表明，TRs在肿瘤中的异常包括突变和表达水平异常。肿瘤中TRs的单一突变较少，多数为多发突变，多数突变点位于TR与T3结合的LBD区，并发现其突变程度与肿瘤分期呈正相关，恶性程度越高其突变位点也越多[11]。突变的TRs由于失去了与T3的结合能力因此会表现为甲状腺激素抵抗综合征(Resistance to Thyroid Hormone Syndrome，RTHS)，由于本研究旨在探讨正常的TRβ1在PTC中的表达及意义，因此在病理选择中我们排除了RTHS的患者。Takano等[12]通过检测PTC切除标本也发现，PTC中TRβ1失活性的突变发生率较低，因此大部分PTC中的TRβ1为功能正常的TRs。

目前资料表明，TRβ1可能在肿瘤的发生发展中扮演了一个很重要的角色，但目前研究结果对其在肿瘤中的作用仍未能达成一致，在不同肿瘤中TRβ1表达情况的检测结果也有较大差别：Lin等[13]发现TRB1基因在肝癌细胞中呈现高表达，并且与抑制肿瘤转移的nm23基因表达呈负相关；而Nauman等[14]则报道TRB1在大多数肾癌组织中呈低表达。Puzianowska-Kuznicka[15]发现PTC中TRβ1蛋白表达水平比正常甲状腺组织明显升高，但其在肿瘤中的作用机制则仍未阐明。总结目前文献报道，TRβ1在不同的肿瘤中可能发挥了截然不同的作用，因此探讨其在PTC中的表达情况及可能的机制对揭示TRβ1的功能具有重要的意义。

本课题研究通过检测46例PTC、PTC癌旁以及15例正常甲状腺组织发现，TRβ1表达阳性率PTC组织高于癌旁组织及正常组织，并且TRβ1蛋白在PTC组织中的表达与肿瘤直径、淋巴结转移、包膜侵润以及TNM临床分期存在明显相关，发生淋巴结转移组中TRβ1的表达率明显高于无淋巴结转移组。由此推断，TRβ1的高表达可能意味着PTC的侵袭转移以及预后不良。但正如前文所述，TRβ1的功能及作用机制较为复杂，因此我们并不能单以此断定TRβ1为促癌分子，而应尽量从分子机制方面阐明其在PTC中可能发挥的作用。

当然由于条件所限，本实验采集样本量较少，对实验数据分析缺乏大量长期随访统计，故而虽然初步发现TRβ1与PTC的侵袭转移和临床TNM分期有明显的相关性，但本实验只是对TRβ1在PTC进展中可能的作用做了初步探讨，TRβ1在PTC组织中的表达水平显著升高，提示该蛋白可能在PTC的发生发展中发挥了重要作用，这些仍需要进一步实验来揭示。

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Expressionandclinicalsignificanceofthyroidreceptorbeta1in46papillarythyroidcarcinoma

RENRong1，GAOZhuo-ping1，ZHAOji-yuan2

(1.The Guang Ren Affiliated Hospital of Xi'an Jiao Tong University Department of Otolaryngology Head and neck surgery；2.The First Affiliated Hospital of Xi'an Jiao Tong University Department of Otolaryngology Head and neck surgery，xi'an 710004 China)

ObjectiveThis research was aimed to investigate the expression of TRβ1 in PTC specimens and the relationship between the clinical characters of PTC，uncover the potential role played by TRβ1 in PTC progress and invasion and the possible mechanism of molecular targeted therapy of PTC，provide theoretical and experimental basis for the choice of targeted therapy against PTC.MethodsTRβ1 expressions in PTC tissues were assaied by immunohistochemical staining，the optical microscope to observe the differences between groups，and analysis of clinical data with the gender，age，tumor size，lymph node metastasis，capsule invasion and TNM stage.ResultsThe chi-square test indicated that TRβ1 expression in PTC tissue was higher than in adjacent tissues (χ2= 4.423，P=0.035)as well as in normal tissue (P<0.05).TRβ1 protein in PTC tissues illustrated no relevance with patient's gender and age (P>0.05)；but significant corelated to tumor size，lymph node metastasis，capsule invasion，and TNM clinical stage presence (P<0.05).ConclusionThe result suggests that there may be a prognostic and recurrencal potential in PTC，TRβ1 may play an important role in PTC progress，further investigation was required to confirmed.

Thyroid hormone receptors； Papillary thyroid carcinoma

R762

A

1672-2639(2012)03-004-05

2012-04-15；责任编辑赵菊梅]