王庆忠

（1.山东省高校生物化学与分子生物学重点实验室，山东 潍坊 261061；2.潍坊学院，山东 潍坊 261061）

生姜（Zingiber officinale）是药食同源植物，具有驱风散寒、健胃止吐、抑菌杀虫、抗肿瘤等作用。生姜醇提取物（Zingiber officinale extraction in alcohol，CCM）含姜黄素等多种物质，其中的姜黄素为姜的重要活性成分之一，广泛用于食品添加剂和着色剂，具有抗HIV、抗利什曼原虫、抗细胞畸变、抑制血小板聚集和血栓形成等多种作用[1-2]。尤其是生姜醇提取物的抗癌活性在近年来受到广泛重视。研究表明，生姜醇提取物可诱导细胞凋亡，对宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、乳腺癌等各种癌症的发生有抑制和治疗作用[3-11]。但关于生姜醇提取物对精子发生和睾丸肿瘤的作用，至今未见报道。TM4细胞株来源于小鼠睾丸支持细胞（Sertoli cells），在体外培养中具有支持细胞、上皮细胞和肿瘤细胞的特性。通过研究生姜醇提取物对TM4细胞的影响，可反映其对哺乳动物和人的生精作用和睾丸肿瘤发生的作用。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器

L-谷胺酰胺、青霉素、链霉素、葡萄糖、二甲基亚枫（DMSO）、胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）、DMEM、胰蛋白酶（Trypsin）、明胶、MTT（甲基四氢叶酸盐）等试剂均购于Sigma-Aldrich公司；TUNNEL细胞凋亡检测试剂盒为凯基生物有限公司产品；其它一般试剂均为国产分析纯。主要仪器包括细胞培养板、细胞培养瓶（北京鼎国生物有限公司）、CO2培养箱（美国Precision Scientific Inc.）、倒置显微镜（日本Olympus）、An Thos TH2酶标仪（Austria公司）等。

1.2 细胞株与培养条件

小鼠支持细胞系TM4细胞株由中国科学院动物研究所生殖生物学重点实验室惠赠。

细胞培养基是以DMEM为基本培养液，添加2mM L-谷氨酰胺、5%FBS、100unit／ml青霉素和100ug／ml链霉素。……