毕 超 杨 侠 董晓光

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病微血管病变在眼底的独特表现，是糖尿病患者低视力和致盲的主要原因[1]。目前研究已证实糖基化终末产物(advanced glycation end-products，AGE)在糖尿病微血管并发症中发挥着重要作用[2-3]。近期研究发现，AGE-牛血清白蛋白(AGE-bovine serum albumin，AGE-BSA)可诱导血管内皮细胞发生间质转型，细胞的迁移活性及成管能力增强[4]。已知新生血管形成早期的关键步骤是内皮细胞的迁移，而细胞迁移的中心环节是细胞骨架的重构[5]。目前未见AGE影响血管内皮细胞迁移过程中骨架重构的相关报道。膜联蛋白A2(annexin A2，ANXA2)作为组织纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator，tPA)及纤溶酶原的共受体，其促纤溶作用可促进角膜及视网膜新生血管的形成[6-7]。近期研究表明，作为膜-肌动蛋白细胞骨架间的连接，ANXA2可促使小肠上皮细胞骨架重构而发生迁移并涉及细胞的上皮-间质转型及成管活动[8-9]。由此设想，AGE在DR病程进展中通过诱导细胞骨架重构而促进迁移，而ANXA2则在其中发挥着中介作用。为证实上述假设，我们以AGE-BSA培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)为模型，检测ANXA2的表达变化，并通过干扰ANXA2的表达观察细胞微丝骨架及迁移能力的变化，探讨ANXA2在DR发病进展中的作用，以期为视网膜新生血管性疾病的治疗寻找有效的作用靶点提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 HUVEC来自北卡罗来纳大学Cora-Jean S.Edgell惠赠。糖基化牛血清白蛋白(AGE-BSA)、牛血清白蛋白(BSA:美国Bio Vision公司)，人源性膜联蛋白A2阳性干扰RNA、阴性干扰RNA(ANXA2 siRNA、control siRNA:德国 Qiagen公司)，LipofectamineTM2000转染试剂(美国Invitrogen公司)，兔抗人ANXA2多克隆抗体、Protein A/G琼脂糖珠……