朱 艳 朱玉广 张立华 钟莹莹 杜孝楠 张 荣 王 杰

晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LEC)的转分化是后囊膜混浊(posterior capsular opacification，PCO)的主要病理改变[1]。转化生长因子-β2(transforming growth factor β2，TGF-β2)是促进 LEC 转分化最主要的因子[2-3]。TGF-β可以调节多种细胞整合素β1的表达[4]，但TGF-β对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells，HLEC)整合素 β1 表达的作用鲜见报道。MAPK信号转导通路是整合素β1介导的信号转导通路之一，整合素介导的细胞与细胞外基质蛋白的黏附能够激活ERK信号通路。最近研究发现，整合素介导的信号通道参与了TGF-β2介导的LEC移行[5]。因此，我们推测，整合素介导的ERK/MAPK信号通道可能参与了LEC转分化过程。为了验证推测，我们设计此课题，以探讨PCO的发病机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 DMEM培养基(Hyclone公司)、胎牛血清(Gibco公司)、TGF-β2(Perprotech 公司)、兔抗人整合素β1抗体、兔抗人磷酸化ERK(pERK)抗体、兔抗人F-actin抗体(Santa Cruz公司)、二步法免疫细胞化学检测试剂盒(北京中杉金桥)、PCR扩增试剂盒(Casarray公司)、PCR引物(上海生工)。

1.2 HLEC的培养与传代 人晶状体取自本院角膜移植术后供体眼球(死亡时间＜24 h，年龄＜40岁)。供体眼球用体积分数70%酒精消毒，庆大霉素溶液冲洗。无菌条件下剖开眼球，除去角膜和虹膜，沿赤道部剖开晶状体，将前囊膜剪成1 mm×1 mm组织块，种植在培养皿中，滴入2滴DMEM培养液，将培养皿放入温箱贴壁0.5～1.0 h。取出培养皿，加入含体积分数15%胎牛血清的DMEM培养液，放入CO2培养箱培养，以后每3～4 d换1次培养液。1～2周近融合，待细胞90%融合时，胰蛋白酶消化，1∶3传代，选择传5代的细胞进行实验。

1.3 MTT法检测TGF-β2对HLEC增殖的影响将HLEC以每孔10×103个接种于96孔培养板中，每孔100 μL，孵育24 h后加入 TGF-β2使之终质量……