庞德湘 周 楠 边至慰 浙江中医药大学附属第二医院肿瘤科 杭州310053

原发性支气管肺癌（简称肺癌）是全球常见的恶性肿瘤，第三次全国居民死因调查结果显示，我国肺癌的病死率与30年前相比上升了46.5%，已成为我国首位恶性肿瘤死亡原因[1]。肺金生方由《金匮要略》经典方泽漆汤结合现代药理实验结果化裁而成，临床治疗肺癌患者疗效显著[2]，近年有关于其疗效的临床报道，但有关其抗肿瘤机制的研究尚为少见。本实验通过观察肺金生方对Lewis 肺癌小鼠VEGF-C、nm23表达的影响，探讨肺金生方抗肿瘤转移的机制及途径，从而为临床使用提供科学依据。

1 实验材料

1.1 实验动物及瘤株 C57BL/6小鼠60只，雄性，5～6周龄，体质量18～20g，清洁级，购自浙江中医药大学动物实验中心。Lewis荷瘤鼠：购自浙江中医药大学动物实验中心。

1.2 药 物 肺金生方，由泽漆30g，前胡10g，人参、桂枝各9g，红豆杉枝8g，蜂房15g，石见穿30g 等组成，按《中药药理研究方法学》计算小鼠的等效剂量，肺金生方低、中、高剂量分别相当于临床成人用量的5、10、20 倍，常规水煎，取煎液浓缩，浓缩成0.925、1.85、3.7g/mL。灭菌后置4℃冰箱保存备用。

1.3 主要试剂及仪器 兔抗鼠VEGF-C、VEGFR-D、P53、nm23、PCNA 单克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，多聚赖氨酸、SP-9001、DAB试剂盒购于杭州达文生物有限公司。超净台（苏州净化设备有限公司），电子显微镜（日本，Nikon.E80i型），多功能真彩色细胞图象分析管理系统（美国Media Cybernetics 公司Image-Pro Plus）；切片机（德国莱卡RM2015）；离心机（北京离心机厂LDZ5-2 型）；干燥箱（日本三洋MIR-153型）；恒温水浴箱（江苏太仓医用仪器厂DSHZ-300型）。

2 实验方法

2.1 动物造模及分组 将Lewis 荷瘤小鼠脱颈椎处死，放入75%酒精中浸泡消毒10min，在超净工作台上分离瘤体。……