王艳杰，张立德，王 健，关洪全，刘旭东，刘慧慧，柴纪严，赵金茹，王德山

(辽宁中医药大学，沈阳 110032)

近年来对于5-HT与IBS关系的研究已成为热点。因此本课题组通过建立腹泻型肠易激综合征(D-IBS)大鼠模型，并观察眼针对该模型大鼠结肠组织中5-HT表达的影响，探索眼针对IBS治疗的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级雄性Wistar大鼠30只，北京维通利华实验动物技术有限公司提供(许可证编号SCXK(京)2007-0001)，体重 220g±20g。

1.2 主要试剂和仪器

大鼠 5-HT ELISA试剂盒(美国 ADL公司，Catalogue No:QRCT-301330121013EIA/UTL);兔抗大鼠5-HT抗体(美国 ADL公司)、SABC试剂盒和DAB等(武汉博士德生物工程有限公司)。2010型anthos酶标仪(奥地利安图斯);RM2235型手动石蜡切片机，EG1150C型包埋机，HI1220型烘片机(德国LEICA)，BX51型OLYMPUS反射荧光显微镜(日本OLYMPUS)。

1.3 动物分组、模型建立和评价

30只SPF级Wistar大鼠按照随机数字法分为正常组、IBS模型组、眼针组3组，每组10只，分笼饲养，标准颗粒饲料喂养7d以适应实验室环境，然后开始建立D-IBS动物模型。其中IBS模型组和眼针组采用慢性应激结合束缚方法建立D-IBS模型。D-IBS的模型建立和评价参考王艳杰等［1］的报道。以 Katz 等慢性应激法［2］与 Williams等［3］束缚方法结合建立D-IBS模型。在18d中让大鼠随机循环接受6种不同的应激刺激，包括:①冷水游泳(14℃，5min);②夹尾(180 s);③禁水(24 h);④禁食(24 h);⑤电击(电压为 30 V，电击 5 s，间歇 5 s，共进行120 s);⑥高温(温箱中40℃30min);每天随机接受1种刺激，18d内平均每种刺激3次，同时每天给予30%水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉，用胶带束缚前肩、前上肢及胸部，限制其搔抓头面部，束缚时间1h。观察大鼠一般状态、结肠组织病理学、结肠转运功能和肠道敏感性等变化对模型进行评价。……