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(1.宁夏回族自治区隆德县动物卫生监督所，宁夏隆德 756300；2.宁夏回族自治区隆德县奠安畜牧兽医站；3.宁夏回族自治区隆德县畜牧技术推广服务中心)

胚胎移植技术是家畜胚胎工程的基础与关键技术。目前国际上每处理1头供体牛,获可用胚5.5～8.0枚,鲜胚移植妊娠率高达55%～65%，冻胚移植妊娠率达50%～60%。某些发达国家，如美国、西欧、日本均已成功实现了产业化。我国在胚胎移植方面的研究始于20世纪70年代,并先后在牛、羊、兔、猪等家畜取得了成功，一般每处理1头供体牛，可获可用胚胎4.5～6.0枚，牛鲜胚移植妊娠率为50%～60%，冻胚一般在45%～55%[1]。

目前,胚胎移植技术已成为良种引进、育种、扩大种群、保存遗传资源的有效方法。然而,由于受许多条件限制,我国牛胚胎移植至今尚未全面进入商业化应用阶段。分析原因很多,其中除胚胎生产的成本较高外,另一个主要原因是胚胎移植受胎率较低。在保证胚胎高质量的情况下，受体的饲养管理是影响胚胎受胎率的关键因素。本试验旨在确保胚胎质量的条件下，研究如何提高受体移植受胎率的问题。

1 材料与方法

1.1试验材料

1.1.1受体牛 选自宁夏某养牛场,品种为黄牛，发情周期正常，直肠检查无繁殖机能障碍和生殖器官疾病。年龄3～6岁，经产牛为产后90 d以上，按常规饲养方式饲养。

1.1.2供试胚胎 自制冻胚，冷冻前组织形态学鉴定均为A级。

1.1.3供试药品 PG(氯前列烯醇)，由上海某计划生育研究所生产，规格为0.2 mg/2 mL/支；VADE，由中科院某生物药品厂生产，100 mL/瓶；HCG，由宁波某激素厂生产，1 000 IU/瓶。

1.2试验方法 预选合格受体牛490头,随机分为6组。

第1组(对照组)：直接应用2次PG，在第1次注射后，间隔11 d进行第2次注射。每次注射量为2支/头。

第2组：每头肌内注射0.3%亚硒酸钠10 mL。

第3组：每头肌内注射VADE10 mL。

第4组：常规饲料中添加5%能量饲料。

第5组：每头肌内注射HCG 2 000 IU。

第6组：常规饲料中添加5%蛋白质饲料，保证饲料中总蛋白量达到12%左右。

1.3受体牛发情和黄体鉴定 对受体牛进行48h不间断发情观察，以静立接受爬跨为标准，准确记录发情开始时间。发情后，第7 d进行黄体检查。直肠检查一侧黄体直径达1.2 cm以上，软硬度适中均匀，形状为球形或卵圆形，确定为合格黄体，进行胚胎移植。

1.4黄体质量分级标准 详见表1。

1.5统计分析 所有数据采用t检验。

2 结果与分析

试验采用冷冻前鉴定为A级的冷冻胚胎215枚，移植受体牛215头，受胎116头，受胎率53.9%。不同处理方式对受体受胎率的影响详见表2。

表1 黄体质量分级标准

表2 不同处理方式对受体受胎率的影响

由表2可见，同期发情处理的发情率和黄体合格率，第1组与第4、6组差异不显著(P>0.05)，第1组与第2、3、5组之间差异显著(P<0.05)。试验表明，注射亚硒酸钠(第2组)、VADE(第3组)、HCG(第5组)可提高受体受胎率5%～10%。

另据试验，受体牛子宫和黄体的生理状况是影响移植受胎率的主要因素之一，子宫和黄体等级为A级时移植受胎率达55.8%，B级时受胎率为45.9%，C级时受胎率为6.7%，详见表3。

表3 黄体质量对移植受胎率的影响观察

3 分析讨论

3.1据生产实践，受体牛群的饲养管理、营养状况可直接影响母牛的排卵、着床和妊娠。据李树静(2001)[2]等报道，对放牧型不补饲、放牧型补饲和标准舍饲型3种饲养方式的牛群进行胚胎移植效果试验，其妊娠率分别为35.6%、48.5%和52.0%，放牧型补饲、标准舍饲受体的移植妊娠率显著高于放牧型不补饲的受体。因此，必须重视牛群的饲养管理工作，满足其各种营养需要，防止营养水平的极端化供给。但营养应激对孕酮水平的影响仍有不同争议，大多数学者认为，营养应激会造成黄体重量变轻，发育程度达不到移植标准，从而影响移植受胎率[3]。据试验，对体况较差的个体，增加营养有利于提高妊娠率，因为正在发育的胚胎或胎儿在附植前和附植过程中对降低营养水平的反应十分敏感[4]。相反，体况过肥的母牛，如果提高营养水平则会明显降低妊娠率。另外，有研究表明，饲养管理不当也会造成胚胎移植受体流产率升高[5]。本次试验结果，在常规饲养管理条件下，增加5%能量水平和5%蛋白质水平，对移植受体的受胎率与对照组相比，无明显影响。

3.2据试验，在良好的饲养管理条件下，受体牛的子宫及卵巢生理状况是影响受胎率的主要因素之一。试验结果表明，受体牛子宫及卵巢生理状况A级比B级的受胎率提高21%，而C级的受胎率明显低于A、B级，说明子宫卵巢黄体的生理状况可明显影响受体的受胎率，进行胚胎移植时，受体牛子宫的黄体状况必须达到A级或B级。

3.3在胚胎质量较好的情况下，胚胎移植时子宫内细菌感染是造成受胎率降低的重要因素，子宫在黄体期的抗感染能力要比发情期差。据门红升等(1998)[6]报道，87.5%母牛的阴道前庭部存在链球菌等各种细菌，29.2%的牛阴道深部带菌。因此，移植前阴部的清洁和消毒及操作过程的无菌环境非常重要。另外，胚胎移植前对受体牛分别注射HCG(2 000～3 000 IU/头)、维生素制剂(10 mL/头)和子宫内注射碘剂(20～50 mL/头)，结果注射HCG比对照组的受胎率高6%，维生素在缺乏时可以增加受胎率5%～10%，碘制剂则未见预期效果。

[1]陈静波,窦忠英.牛胚胎移植技术在我国养牛业中的应用及前景[J].黑龙江动物繁殖，2002(4)：16-18.

[2]李树静，余文莉.牛胚胎移植技术在中国内蒙古的研究和应用[J].中国兽医学报，2001(1)：92-95.

[3]柏学进，薛建华，等.牛胚胎移植技术的开发与应用研究阶段总结报告[J].黑龙江畜牧科技，1999(4)：14-16.

[4]丁玉臣.提高牛胚胎移植受胎率的措施[J].河北畜牧兽医，2003(8)：40-41.

[5]朱志伟,俞颂东，等.提高牛冷冻胚胎移植妊娠产犊率的研究[J].浙江农业学报，2003(1):31-35.

[6]门红升，季维智，杨上川，等.提高胚胎移植中受体牛妊娠率的研究进展[J].动物学研究，1998(2):165-170.