赵 瑾，陈 洪，林陈水

（浙江工业大学 药学院，浙江 杭州310032）

骨形态发生蛋白－2（Bone Morphogenetic Protein－2，BMP－2）属于转化生长因子超家族成员［1］，BMP－2因其诱导成骨活性最强而成为骨科研究的热点［2］.天然的 BMP－2含有114个氨基酸，其成熟肽中含有7个高度保守的半胱氨酸，活性形成多为其同源二聚体.骨组织中骨形态发生蛋白含量低，提取工艺复杂，产物纯度有限，难以适应科学研究和临床应用的需要；真核表达系统制备产物活性相对较高，但表达量低、生产成本高、周期长［3］；大肠杆菌是目前基因工程中应用最为广泛的宿主细胞，具有操作简单，成本低，周期短，产量大等特点，但外源蛋白往往错误折叠以没有生物活性的包涵体形式表达［4］.麦芽糖结合蛋白（MBP）是一种融合伴侣，分子量约为42kD，可增加与之结合的目的蛋白的可溶性［5－6］.T载体是近年来发展起来的一种用于直接克隆PCR产物的新型载体，pMT－L是由本实验室构建的去除信号肽序列的MBP胞内融合表达型T载体，可直接用XcmⅠ酶切该载体，插入PCR产物，一步法构建融合表达基因工程菌［7］.本研究通过将目的基因BMP－2用TA克隆法重组到无信号肽MBP基因的下游，在胞内可溶性表达目的蛋白，避免沉淀或聚合成为多聚体.因融合伴侣与BMP－2之间连有“连接肽－6His－Eksite”序列，有利于目的蛋白的分离纯化，降低生产成本.

1 材料和方法

1.1 材 料

1）质粒载体及菌株：pMT－L（胞内融合表达型T载体），含BMP－2编码基因的Fsx重组菌株均由实验室构建保存；E.coliDH5α菌株，E.coliBL21（DE3）菌株均由实验室保存.

2）酶及主要试剂：T4噬菌体DNA连接酶购自……