张香斋，陈丽凤，陈 娟，王秋悦，刘朋朋，石 芳，邹亚学

(河北科技师范学院动物科技学院，河北省预防兽医学重点实验室，河北秦皇岛，066600)

梨形虫病是一类经硬蜱传播，由梨形虫纲巴贝斯科或泰勒科原虫引起的血液原虫病的总称。迄今为止，全世界已记载的各种哺乳动物的巴贝斯虫有67种，泰勒虫有13种［1］。牛梨形虫病是世界性分布的严重危害养牛业发展的一类重要疾病，给畜牧业和国民经济造成巨大损失。在我国已报道的病原有牛巴贝虫(Babesia bovis)、双芽巴贝虫(B．bigemina)、大巴贝虫(B．major)、卵形巴贝虫(B．ovata)、一种尚未命名的巴贝虫(B．sp．)［2］、环形泰勒虫(Theileria annulata)、瑟氏泰勒虫(T．sergenti)和中华泰勒虫(T．sinensis)［3］。牛梨形虫病的传播媒介蜱有3种:残缘璃眼蜱(Hyalomma detritum)、长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)和微小牛蜱(Boophihismicrophis)。据FAO统计，世界上有80%的牛遭到蜱的侵袭，仅硬蜱给畜牧业造成的损失，全球每年就高达70亿美元［4］。本试验应用PCR诊断技术，对采自河北省滦县某牛场的牛进行梨形虫检测，以便了解和分析该地区梨形虫自然感染状况，为更好地防治该病提供一些参考。

1 材料与方法

1．1 试验材料

1．1．1 牛血液 采自河北省滦县某牛场。

1．1．2 主要试剂及缓冲液配制 50 ×TAE:取 Tris碱242 g，冰乙酸57．1 mL，0．5 mol/L EDTA(pH 8．0)100 mL加入纯水定容至1 L，储存备用;蛋白酶K(德国Merck公司)、无水乙醇(天津市北方天医化学试剂厂)、琼脂糖(西班牙进口分装)。PCR相关试剂，2×Taq MasterMix(北京康为世纪生物科技有限公司)，引物(北京赛百盛生物技术有限责任公司)。DL2000(北京博润德生物科技发展中心)。

1．1．3 仪器设备 超级恒温水浴箱(601型、金坛市医疗仪器厂)、高速台式离心机(TGL-16G，上海安……