郭少娟，张中旺，张永光，王永录，潘 丽，吕建亮，周 鹏

（中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室，农业部畜禽病毒学重点开放实验室，甘肃 兰州 730046）

口蹄疫是由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，以宿主范围广、传染性强、传播迅速著称，因严重危害发病动物的生产性能和畜产品质量，造成巨大经济损失，极大地冲击爆发国家的国际贸易，被世界动物卫生组织（OIE）列为A类疾病。FMDV结构蛋白构成病毒衣壳，识别特异性细胞受体，决定宿主范围和组织嗜性，决定病毒抗原性等功能。结构蛋白P1是主要的免疫保护性蛋白，通过原核表达P1蛋白，纯化后免疫动物制备多克隆血清，是一种研究结构蛋白P1功能的有效工具。FMDV是单股RNA病毒，具有高频率的核苷酸替代特性。FMDV的各种适应毒的获得是进一步研究此毒特性、应用的基础，所以对适应毒变异的鉴定是必要的[1]。研究对表达P1蛋白制备的多克隆兔抗及AsiaⅠ/HeB株FMDV在试验动物和细胞上适应后是否变异进行了鉴定。

1 材料与方法

1.1 病毒及主要试剂

FMDV HeB株由国家口蹄疫参考实验室毒种保藏中心提供，BHK-21细胞株由中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室提供，RNeasy Mini Kit（Qiagen公司），Prime－Script＠ One Step RT-PCR Kit Ver 3.0（大连宝生物公司），胶回收试剂盒Wizard＠SV Gel and PCR Clean-UP System（Promega公司），灭活的口蹄疫病毒抗原由兰州兽医研究所马军武老师提供。2～3日龄乳鼠，300～400 g豚鼠由兰州兽医研究所动物厂提供。重组克隆载体pGEM-P1、多克隆兔抗由中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室制备保存。……