陈艳明 封萍 严加林

VEGF和CD31在皮肤鳞癌中的表达

陈艳明 封萍 严加林

目的观察皮肤鳞癌(SSCC)中血管内皮生长因子(VEGF)和内皮细胞黏附分子(CD31)的表达，研究其与皮肤鳞癌发展的关系。方法采用免疫组化染色法检测正常皮肤组织及鳞癌组织中VEGF和CD31的表达变化。结果在正常组织中，VEGF和CD31表达低于鳞癌皮损组织，在Ⅲ～Ⅳ期鳞癌中的表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期鳞癌中的表达(P＜0.05)。结论VEGF及CD31蛋白的异常表达在皮肤鳞癌的进展过程中发挥重要作用。

鳞癌;免疫组化;VEGF;CD31

皮肤鳞状细胞癌(Squamous Cell Carcinoma，SCC)是最常见的皮肤癌之一。本文主要通过检测其血管内皮生长因子(VEGF)和内皮细胞黏附分子(CD31)在皮肤鳞状细胞癌中的表达，分析其与皮肤鳞癌发生过程中的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 标本来源 收集临床和病理确诊的鳞癌蜡块40例(Ⅰ～Ⅱ期鳞癌20例，Ⅲ～Ⅳ期鳞癌20例，其中男22例，女18例;年龄40～72岁，平均59.2岁)。20例正常组织中男11例，女9例，年龄41～71岁，平均56.1岁。此两组年龄、性别无显著差异性。正常皮肤标本经 3.33 mol/L(10%)福尔马林固定24 h，常规石蜡包埋连续切片4 μm厚。原蜡块标本直接切片4 μm厚。

1.1.2 鳞癌分期 Ⅰ期:未分化细胞数 ＜25%;Ⅱ期:未分化细胞数 ＞25%而 ＜50%;Ⅲ期:未分化细胞数 ＞50%而＜75%;Ⅳ期:未分化细胞数 ＞75%［1］。

1.1.3 主要试剂 兔抗人VEGF多克隆抗体、兔抗鼠CD31单克隆抗体由美国Santa Cruz公司生产，购于武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 方法 免疫组化分析:用多聚赖氨酸处理后的切片，60℃烤片20 min，常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，PBS洗3次，5 min/次，高温高压抗原修复，滴加50 μl内源性过氧化物酶阻断剂，37℃10 min，PBS冲洗3次 ×5 min;滴加非免疫性动物血清，37℃10 min;弃去非免疫性动物血清;滴加一抗VEGFR-3、CD31(皆为1∶100稀释工作液)，4℃过夜，PBS洗3次×5 min;滴加二抗，37℃孵育30 min，PBS洗3次×5 min;滴加50 μl链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液，37℃孵育30 min，PBS洗3 次 ×5 min;滴加 100 μl新鲜配制的 DAB 溶液，显色5～10 min;自来水冲洗，苏木素复染，乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。PIPS-2020超清晰度病理图文分析系统检测平均光密度。PBS替代一抗作为空白对照。

作者单位:421001 衡阳，南华大学附属第二医院(陈艳明 严加林);南华大学附属南华医院重症监护室(封萍)

1.3 结果判定 VEGF以细胞质中出现黄色或棕黄色颗粒计为阳性细胞。参照 Zhong等［2］的评判标准，每例标本选取5个(×200)高倍镜视野计数，计算每个视野中阳性细胞所占比例进行半定量计数分级:＞10%即为阳性。CD31结果判断标准按Weidner［3］报道的方法进行:每张切片均在200倍视野下选取3个血管数目最多的视野，计数血管数，计算其平均数(MVD)。微血管的判断标准为:凡着色的内皮细胞或内皮细胞簇，无论血管腔隙大小，均以其断面多少来计数(厚壁血管除外)。

1.4 统计学方法 采用χ2检验。统计分析在SPSS 11.5统计软件中进行，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SCC中 VEGF蛋白的表达与定位 VEGF以内皮细胞胞浆和胞膜的棕黄色颗粒状染色为主，偶见细胞核染色。VEGF在皮肤鳞癌组织中阳性表达较正常皮肤组高，两者差异有显著性(P＜0.05)。见表1。

2.2 SCC中CD31蛋白的表达 CD31是一种内皮细胞粘附分子，可在多数肿瘤组织的血管内皮细胞中表达，与肿瘤新生血管的形成亦密切相关。CD31阳性表达主要表现为内皮细胞胞浆和胞膜的棕黄色颗粒状染色，可较好的反映出肿瘤中的MVD情况。正常皮肤组织中MVD值为19.83，在I～Ⅱ期鳞癌组织中MVD值为38.46，在Ⅲ～Ⅳ期鳞癌组织中MVD值为48.35。各病变组与正常皮肤组织相比均有显著差异(P＜0.05)。见表2。

表1 VEGF免疫组化染色结果

表2 MVD-CD31在各组皮肤组织中的表达(±s)

表2 MVD-CD31在各组皮肤组织中的表达(±s)

注:*与正常皮肤组织比较，P＜0.05

组别 例数 阳性例数(%) MVD值 P值正常皮肤组织 20 20(100)19.83±2.59Ⅰ～Ⅱ期 20 20(100) 38.46±4.79 ＜0.05*Ⅲ～Ⅳ期 20 20(100) 48.35±5.01 ＜0.05*

3 讨论

肿瘤的生长离不开其相关血管的建立，血管的存在不仅可以满足肿瘤所需的氧份，也是实现对周围组织的浸润和转移的必备条件［4］。同时在肿瘤的生长、侵袭、转移过程中新生血管形成起极其重要的作用。血管内皮生长因子(VEGF)是目前所知的作用最强的促血管生长因子，与肿瘤的生长、浸润、转移有着密切的关系，已在多种肿瘤研究中被证实是高表达，且表达水平与肿瘤发展进程呈正相关［5］。因此，VEGF在肿瘤患者体内的表达可反映机体的肿瘤负荷情况，与肿瘤的大小、进展及分化程度、是否出现淋巴结和血源转移、复发及术后生存期密切有关，对于肿瘤生物学行为、病情进展和治疗成效等方面的判断具有重要价值。本研究发现，在皮肤SCC中VEGF蛋白的表达明显高于正常皮肤对照组的表达，这与Bowden等［6］的研究结果相一致。

CD31是内皮细胞粘附分子，主要由内皮细胞及淋巴结中分化期的单核细胞分泌，可在多数肿瘤组织的血管和淋巴管内皮细胞中表达，也与肿瘤新生血管的形成相关，反映了肿瘤的转移、侵袭特征。CD31被认为是目前血管内皮细胞的最好方法之一。许多学者认为在一些肿瘤组织如肺癌、食管癌及肝癌，CD31有较高的表达率［7］。本实验通过免疫组化染色检测CD31的表达，并通过计算MVD(微血管密度)比较各组皮肤组织中的表达差异。结果表明，CD31在正常皮肤组织中呈现低表达，随着皮肤鳞癌分期数的增加，CD31的阳性表达明显升高，与分期密切相关。

综上实验结果，我们发现VEGF在皮肤鳞癌组织中的表达和MVD具有相关性，VEGF高表达者中，MVD亦高表达，进一步证实了VEGF与血管生成的密切关系。通过检测VEGF及CD31蛋白的表达程度可能可以反映皮肤鳞癌的分期程度。

［1］赵辨.临床皮肤病学.江苏科学技术出版社，2001:1123-1125．

［2］Zhong H，De Marao A M，Laughner E，et al.Overexpression of hypoxia-inducible factor 1 alpha in commom human cancers and theirmetastases.Cancer Res，1999，59(22):5830-5835．

［3］Weidner N，Semple JP，Welch WR.et al.Tumor angiogenesis and metastasis.Correlation in invasi ve breast carci noma.New Engli J Med，1991，324:1．

［4］Folkman J.Angiogenesis in cancer，vascular，rheum atoid and other disease.Nature Med，1995，1(1):27-31．

［5］Shibata A，Nagaya T，Imai T，et al.Expression of vascular endothelial growth factor and its possible relation with neovascularization in human brain tumors.Cancer Res，1995，5(5):1189-1193．

［6］Bowden J，Brennan PA，Umar T，et al.Expression of vascularendothelial growth factor in basal cell carcinoma and cutaneous squamous cell carcinoma of the head and neck.J Cutan Pathol，2002，29(10):585-589．

［7］Frachon S，Gouysse G，Dumortier J，et al.Endothelial cell marker expression in dysplastic lesions of the liver:an immunohistochemical study.J Hepatol，2001，34(6):850-857．

The expression of VEGF and CD31 in skin squamous cell carcinoma

CHEN Yan-ming，FENG Ping，YAN Jia-lin.The Second Affiliated Hospital of Nanhua University，Hengyang 421001，China

ObjectiveTo investigate the expression of VEGF and CD31 and the relationship with the development in skin squamous cell carcinoma(SSCC).MethodsThe expression of VEGF and CD31 in normal human epidermis and SSCC were detected by immunohistochemistry staining method.ResultsVEGF and CD31 proteins were abnormally increased in SSCC as compared with normal human epidermis.Expressions of VEGF and CD31 in SSCCⅠ～Ⅱstages were also significantly higher than those in SSCCⅢ～Ⅳstages．ConclusionThe expression of VEGF and CD31 may play an important role in the pathogenesis of SSCC．

Skin squamous cell carcinoma;Immunohistochemistry staining method;VEGF;CD31