林海泓 罗心平 施海明 龚辉

（1.复旦大学附属金山医院心内科，上海 201508；2.复旦大学附属华山医院心内科，上海 200040）

骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）移植为治疗心肌梗死提供了新思路，但是MSCs移植后的存活率低，使得归巢到损伤心肌的干细胞数量甚少，这极大地影响了MSCs移植的临床应用效果[1]。

他汀类药物除具有降脂作用外，还具有促血管生成、改善内皮功能障碍、抗氧化、抗炎等作用。近年来人们逐渐开始关注他汀类药物与干细胞的关系。文献[2－3]报告，他汀类药物可增加外周血内皮祖细胞数量，延缓其衰老，从而加快受损血管内皮的修复，这可能是他汀类药物心脏保护作用的机制之一，据此推测其对MSCs也可能有类似作用。本研究旨在探讨普伐他汀在体外对H2O2诱导的人MSCs凋亡的影响及其相关机制。

1 资料与方法

1.1 主要试剂 低糖DMEM及胎牛血清购自美国 HyClone公司，0.25%胰酶和0.02%EDTA液购自美国Sigma公司，淋巴细胞分离液购自上海华精生物高科技有限公司，普伐他汀购自中美上海施贵宝制药公司，细胞及组织总蛋白抽提试剂盒、BCA蛋白质定量试剂盒及二抗购自上海康成生物工程公司，PI3K／Akt通路特异抑制剂Ly294002、ERK1／2通路特异抑制剂U0126、一抗AKT抗体、ERK1／2抗体及p38MAPK抗体购自美国Cell Signaling公司，p38MAPK通路特异激动剂anisomycin购自美国Santa Cruz公司。

1.2 人MSCs的分离、培养及鉴定 严格无菌条件下采集志愿者骨髓液5 mL，肝素抗凝，用孔径为0.02 mm的输血器过滤3次，加等量磷酸盐缓冲液（PBS）混匀后，用1 mL针头沿管壁慢慢注入淋巴细胞分离液，2000 r／min离心20 min。轻轻吸出中间白色云雾状细胞层，加入PBS洗涤细胞，1000 r／min离心5 min，共洗3次。……