肖 雄，邓玉金，赵海龙，吴有博，李跃民

（西南大学动物科技学院，重庆400715）

耳皮肤成纤维细胞因具有取材方便、易获取、体外增殖能力强、细胞形态结构稳定、较易进行传代培养和不易发生转化等特点，在体细胞核移植、转基因技术、治疗性克隆和诱导性多能干细胞等研究领域具有重要的应用价值。但是，体外培养的细胞，随着传代次数的增加，细胞各种生物学特征会逐渐发生变化，同时，长期传代也会造成资源浪费。因此，在细胞传代过程中，需要适时进行细胞冷冻保存，以保证体外培养细胞的质量，又便于取用。液氮（－196℃）冷冻保存细胞，理论上是无限久的，但由于目前技术局限，冻存时间越长，细胞复苏后存活率越低。因此，细胞在不同冻存温度、不同冻存方法和不同冷冻保护剂下冻存效率存在差异。本试验以DMEM为基础培养液，以二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）或甘油（glycerol，GL）作为冷冻保护剂，并添加胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）组成冷冻保护液，分别采用4种冷冻降温方法，对体外培养的第3代小鼠耳皮肤成纤维细胞进行冷冻保存。通过比较不同处理组复苏后细胞的存活率和培养48 h后的细胞贴壁率，探讨不同冷冻保存方法和冷冻保护剂对小鼠耳皮肤成纤维细胞解冻复苏后细胞存活率和贴壁率的影响，并对适宜冷冻方法所得小鼠耳皮肤成纤维细胞的生长曲线进行研究，旨在筛选适宜的小鼠耳皮肤成纤维细胞的冷冻保存体系，为小鼠耳皮肤成纤维细胞用于体细胞核移植和重编程为多能干细胞等研究奠定基础。……