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牛环形泰勒虫病二温式PCR诊断方法的建立及初步应用

2012-09-26王振宝刘启生何晓杰刘绪斌叶尔保勒巴音查汗

动物医学进展 2012年5期
关键词:检测方法

王振宝,刘启生,哈 森,何晓杰,刘绪斌,孟 茹,叶尔保勒,巴音查汗*

(1.伊犁出入境检验检疫局综合技术服务中心,新疆伊宁835000;2.新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐830052;3.伊犁职业技术学院,新疆伊宁835000)

牛环形泰勒虫病是由环形泰勒虫(Theileria annulata)引起的一种蜱传性血液原虫病。该病的传播媒介为璃眼蜱属的多种蜱[1],是一种季节性很强的地方性流行病,多呈急性经过,发病率和病死率高,对养牛业造成了巨大的经济损失。牛环形泰勒虫寄生于黄牛、水牛、瘤牛、牦牛及犏牛的红细胞和淋巴细胞内。该病分布广泛,主要流行于北美和大多数中亚及南非地区,我国的西北、华北和东北的一些省区也为多发区[2]。目前,对牛环形泰勒虫病的诊断主要采用血液涂片检查法、淋巴结穿刺检查法、间接荧光抗体试验(IFAT)[3]、酶联免疫吸附试验(ELISA)[4]、聚合酶链反应(PCR)[5]等。血液涂片检查法、淋巴结穿刺检查法检出率低,IFAT和ELISA方法可用于检测牛环形泰勒虫抗体,但其敏感性不足以检出所有感染动物,存在着交叉反应现象。PCR方法和DNA探针技术是目前这些方法中特异性最强、敏感性最高的病原检测手段,但国内尚未见报道。

二温式聚合酶链反应,即二温式PCR,又称双温PCR、或二温度点法PCR和二温度梯度PCR,是根据经典PCR技术原理,对标准PCR进行改进,将退火和延伸合并为一个温度,比标准PCR的退火温度高,提高了反应的特异性,缩短了检测时间[6]。Dodson L A等[7]首先在医学检测领域提出并应用,国内最初由阎小君等[8]进行了研究报道。……

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