周 川，赵云程，黄俊成＊

（1.新疆动物生物技术重点开放实验室，农业部草食家畜繁育生物技术重点开放实验室，新疆乌鲁木齐830000；2.新疆农业大学农学院，新疆乌鲁木齐830052）

细胞融合技术在研究哺乳动物配子发生、发育、核质关系、四倍体的发生、遗传、免疫机制等方面有重要的价值［1］，也有助于获得全部来自胚胎干细胞和多功能诱导干细胞的小鼠［2－3］。制作四倍体胚胎具有3种方法，即药物处理，使DNA加倍；采用显微注射技术将一个二倍体胚胎的细胞核注射到另一个二倍体胚胎中；卵裂球融合法，如电融合法［4－6］、仙台病毒法［7］、化学药物法［1，8］等，其中电融合法最为常用。电融合的原理是在2－细胞胚胎的卵裂球结合面上施加直流电脉冲，使细胞膜造成穿孔而发生融合。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 小鼠、试剂和仪器 昆明小鼠和ICR小鼠购于新疆实验动物研究中心、甘露醇 M1902－500G、蔗糖S1888－500G、胚胎移植水 W1503、NaCl S5836、Na2HPO4S5136、KH2PO4P5655、KCl P5405、M16 M7292均为Sigma公司产品。电融合仪为FHK Fujihira industry 产品，体视镜 SMZ645、倒置镜TE2000－U为 Nikon产品、胎牛血清16000－044为GIBCO公司产品，捡胚和冲胚针自制，培养箱371为Thermo公司产品，PMSG为宁波市激素制品有限公司产品，HCG为宁波第二激素厂产品、35 mm培养皿430165为Corning公司产品。

1.1.2 配液 PBS：NaCl为4 g，KCl为 0.1 g，KH2PO4为0.1 g，Na2HPO4为0.572 16 g；移植液、冲胚液：PBS∶胎牛血清＝9∶1；0.3 mol／L甘露醇融合液：0.273 g甘露醇溶于5 mL胚胎移植水，0.3 mol／L蔗糖融合液：0.513 g蔗糖溶于5 mL胚胎移植水。

1.2 方法

1.2.1 供体及受体超排 新购小鼠进入光周期，9：00～21：00为光照期，其余时间为黑夜。雌鼠育饲至25 g左右控制食量使其体重保持在25 g左右，昆明白雌鼠做供体，ICR雌鼠做受体。供体每天19：00每只雌鼠注射5 IU PMSG，46 h～48 h每只雌鼠注射5 IU HCG，并与雄鼠合笼，受体与结扎雄鼠合笼。……