单学强，李明义，高 轩＊

（1.河北农业大学动物科技学院，河北保定071000；2.山东信得科技股份有限公司，山东青岛266061）

传染性法氏囊病（Infectious bursal disease，IBD）是由传染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）引起的鸡和火鸡的一种高度接触性传染病［1］，给世界各国的养禽业带来了巨大经济损失。从IBDV发现至今，新的变异株和超强毒株不断出现，使得原有传统活疫苗和灭活疫苗无法阻止IBD的发生和流行。因此，迫切需要开发更加安全、有效的新型疫苗。VP2是IBDV主要的宿主保护性抗原［2］，可以诱导宿主机体产生病毒中和性抗体，具有型特异性，已成为近年来是众多学者研究的热点。

本研究利用分离的IBDV LN株基因组核酸为模板，构建重组表达质粒p ET28a－VP2；使用大肠埃希菌进行原核表达，制备VP2蛋白并分析VP2蛋白的生物学活性，为鸡传染性法氏囊病基因工程亚单位疫苗的研制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料 采集发病鸡的法氏囊组织（病料来自辽宁省大连市发病鸡场），置－70℃冷冻保存；SPF鸡胚和SPF鸡购自济南昊泰实验动物繁育有限公司。

1.1.2 主要试剂 E.coli DH5α及E.coli BL21（DE3）为本实验室保存、p MD18－T 载体，购自Ta KaRa公司，p ET28a载体为本实验室保存；IBDV标准抗原及标准阳性血清，购自中国兽医药品监察所；Taq酶及限制性内切酶Eco RⅠ、Hin dⅢ，购自TaKaRa公司；MLV，购自Promega公司；TRIzol Reagent，购自Invitrogen公司；Gel Extraction Kit（50），购自OMEGA公司；HRP标记羊抗鸡IgG，购自索莱宝生物公司。

1.1.3 引物设计与合成 参照GenBank中登录的IBDV VP2序列（AB024076.1），利用生物学软件DNA Star对IBDV VP2基因进行同源性比较和限制性内切酶位点、开放阅读框（ORF）及模拟抗原表位分析，利用primer5，0软件设计两对引物进行套式PCR。扩增片段预计1 370 bp。……