饶正华 李 兰

(中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

[国家饲料质量监督检验中心（北京）]，北京 100081)

玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）是一种具强烈致畸作用的生殖系统霉菌毒素，我国饲料卫生标准中规定了配合饲料和玉米的允许量≤0.5 mg/kg，但我国现有的ZEN检测标准中使用的薄层色谱法为半定量法，酶联免疫吸附法为筛选法，两种方法都不是准确定量法，因此，建立准确高效的检测方法对于检测和控制饲料中玉米赤霉烯酮含量具有重要意义。

免疫亲和柱（IAC）由于其高选择性、高灵敏度、净化效果好、易操作的特点而被普遍用于霉菌毒素的检测。国际标准ISO 17372:2008采用免疫亲和柱净化-高效液相色谱法对饲料中玉米赤霉烯酮进行检测，类似技术路线在检测大豆、油菜籽、植物油等中的玉米赤霉烯酮时也广泛使用。本研究旨在建立饲料中玉米赤霉烯酮的IAC-HPLC荧光检测法。

1 材料与方法

1.1 仪器

振荡器、氮吹仪、高速均质器、高效液相色谱仪（配有荧光检测器）；色谱柱：C18柱，长150 mm，内径4.6 mm，粒度5 μm；真空装置或空气压力泵；玻璃微纤维滤纸（直径 11 cm、孔径 1.5 μm）；试验筛（1 mm孔径）。

1.2 试剂及材料

玉米赤霉烯酮免疫亲和柱（容量≥2 μg）；乙腈、甲醇；氢氧化钠溶液：CNaOH=0.2 mol/l；玉米赤霉烯酮标准品，玉米赤霉烯酮含量≥99.5%；提取剂：乙腈+水（8+2）；磷酸盐缓冲溶液（PBS）：将 8 g氯化钠、1.16 g磷酸氢二钠、0.2 g磷酸二氢钾、0.2 g氯化钾溶解至1 000 ml水中，用氢氧化钠溶液调节pH值至7.4；流动相：量取460 ml乙腈至1 000 ml的容量瓶中，加入460 ml水和80 ml甲醇。混合均匀并通过0.45 μm滤膜，备用。

1.3 标准溶液的配制

玉米赤霉烯酮标准工作液：用流动相分别配制浓度为 0.02、0.05、0.10、0.50、1.0 μg/ml的标准工作液。……