代蕾颖,胡 军,吕 瑛

(北京金菩嘉医疗科技有限公司，北京 100176)

20世纪80年代末，起源于放射性杂交的荧光原位杂交 (FISH)技术开始建立。20多年来，这项技术已经得到了长足的发展，大量商业化探针的出现更使其广泛应用于临床诊断。随着FISH新技术的出现，探针的种类也不断增加，肽核酸探针就是其中一种。肽核酸(Peptide Nucleic Acid，PNA)是一类具有类多肽骨架的DNA类似物，它是不带电荷的分子，避免了寡核苷酸与其靶序列结合时因电荷相互排斥所导致的杂交不稳定性，且PNA与靶序列的结合不易受杂交液离子强度的影响，从而显示出其极强的杂交优势，大大提高了检测灵敏度[1]。PNA-FISH技术适用于多种标本类型，特别是档案标本，如福尔马林固定石蜡包埋的组织。

1 材料与方法

1.1 材料 福尔马林固定石蜡包埋的组织，标记荧光素的PNA探针。

1.2 方法 石蜡组织切片经二甲苯脱蜡后用0.2 mol/L HCL和20μg/ml蛋白酶去除组织自身荧光背景，经过预处理的样本加入标记荧光素的PNA探针，盖上盖玻片，用封片胶封住边缘，放于预热到杂交温度的湿盒内,置于培养箱内杂交90分钟。去掉盖玻片，于预热到杂交温度的洗脱液中洗脱30分钟。样本自然晾干后加入含有DAPI的抗淬灭剂后，在荧光显微镜下进行观察。

2 结果

用PNA探针，对经过预处理的石蜡组织切片不经过高温变性，只经过90分钟55℃杂交，探针可以透过细菌的细胞壁得到信号。通常石蜡组织切片通过常规染色后定位目标区域，然后再在荧光显微镜下找到FISH玻片相对应的目标区域观察。……