张 强 崔天祥 李 莉 杨丽红 孔 静 (郑州大学第二附属医院，河南 郑州 450014)

肾素-血管紧张素系统(RAS)对血压和机体内环境的稳定发挥至关重要的作用。由于RAS的作用均由血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)介导，因此AT1R基因与原发性高血压(EH)相关性的研究成为近年来的热点。血管内皮细胞能合成及分泌多种生物活性物质，对维持管壁张力和血流有重要作用。近年来，一些研究证实高血压存在内皮损伤，而EH患者血管内皮功能的遗传机制研究国内鲜有报道。本研究拟探讨AT1R基因多态性与血管内皮功能在EH发病中的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料

1.1.1 EH组 入选郑州大学第二附属医院高血压门诊EH患者82例，男53例，女29例，年龄(62±6)岁，收缩压(154±12)mmHg，舒张压(86±10)mmHg，均为汉族，EH 诊断符合1999年中国高血压防治指南规定的诊断标准。受试者均无血缘关系，且排除继发性高血压。

1.1.2 正常血压组 33例，来自健康体检人群，男23例，女10例，年龄(60±8)岁，收缩压(120±14)mmHg，舒张压(72±10)mmHg，未服用影响血压的药物对象间无血缘关系。

1.2 检测方法

1.2.1 血样采集 取静脉血5 ml，其中1 ml离心分离血浆，－15℃保存，待测血浆氧化氮(NO)和内皮素(ET);(2)余血加入2%EDTA抗凝管中，－70℃保存，待提取基因组DNA。

1.2.2 AT1R基因的检测 (1)DNA的提取:应用杭州VGENG生物技术有限公司生产的血细胞基因组DNA制备试剂盒提取组织DNA。(2)PCR扩增:AT1R引物序列:上游5'-CAC CAT GTT TTG AGG TT-3'，下游5'-CGA GTT TCT GAC ATT GTT C-3'，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。(3)限制性酶切:PCR扩增产物3 μl加入内含10 U dDeI的限制性内切酶反应缓冲液稀释成20 μl，37℃酶切3 h。(4)电泳分型:酶解产物点样于2%琼脂糖凝胶中电泳30 min后EB染色，紫外灯下观察结果并照相。……