刘学军，杨良丰，史 璐，任延方，岳阳丽，吉雅丽，王庆端

(1.郑州大学口腔医学院，河南郑州450052;2.美国罗切斯特大学牙医学院，罗彻斯特14627;3.郑州大学医药科学研究院，河南郑州450052)

三氧化矿物凝聚体(mineral trioxide aggregate，MTA)是广泛应用于临床的一种新型生物材料，可用于活髓切断、髓室底穿孔修补、根尖诱导形成和根尖倒充填等多个治疗领域，并取得了令人满意的治疗效果［1－2］，虽然大量临床研究报道了关于MTA的疗效，但其作用机制迄今尚不明确。

Takita等［3］研究发现，MTA能促进成人牙髓细胞增殖和分化。Paranjpe等［4］研究发现，MTA能诱导牙髓细胞向成牙本质细胞分化。但是在上述研究中并没有明确指出MTA是对牙髓组织中的何种细胞发生作用的，考虑到牙髓组织中的成牙本质细胞和成纤维细胞均属于终末细胞，而牙髓干细胞是存在于牙髓组织中且具有多向分化潜能的干细胞［5］，因而推测MTA可能作用于牙髓组织中的牙髓干细胞。有鉴于此，本研究拟通过体外培养成人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells，hDPSCs)，观察不同浓度MTA对其增殖和分化的影响以验证这种推测，同时初步探讨MTA作用机制。

1 材料和方法

1.1 牙髓干细胞的培养

取第4代hDPSCs(第四军医大学口腔医学院惠赠)用含100 mL/L胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的α－MEM(Hyclone，美国)培养基在37℃标准环境下进行培养，当细胞生长到80% ～90%时，用胰蛋白酶消化，以1×104/mL的密度接种进行传代培养。

1.2 MTA浸提液的制备

参照 Hakki等［6］的方法，取 0.4 g MTA(Dentsply，美国)加入20 mL无胎牛血清的α－MEM培养液，在恒温振荡器内37℃，200 r/min振荡24 h后，2 000 r/min离心 5 min，取上清液，0.22 μm滤膜过滤除菌，即制成 20 mg/mL MTA 浸提液，然后再用α－MEM分别稀释成2 mg/mL和0.2 mg/mL;同时同法制备2 mg/mL的Ca(OH)2浸提液，分别4℃保存备用。……