于西佼，唐开亮，杜 毅，李 纾

(山东 济南 250001:1.济南市口腔医院牙体牙髓科;2.山东大学省口腔生物医学重点实验室)

Bcl－2是目前已被确认的凋亡调控抑制蛋白，Tsujimoto等［1］(1984)从人14号和18号染色体易位的滤泡性淋巴瘤中分离出的一种原癌基因，编码Mr 26000蛋白，分布于线粒体内膜、细胞膜、细胞核膜和内质网膜上。Bcl－2可促进细胞的存活而减少凋亡的发生，抑制多种基因诱导的细胞凋亡，并在不影响细胞增殖的情况下增强细胞存活力，参与细胞增殖和凋亡动态平衡的调控。

本研究通过制备不同发育阶段的BALB/C小鼠下颌第一磨牙牙胚标本，采用TUNEL法和PV免疫组织化学技术检测凋亡调控抑制蛋白Bcl－2在成釉细胞分化、分泌过程中的表达;透射电镜观察细胞超微结构的变化，以期探讨Bcl－2和细胞凋亡在该过程的可能作用。

1 材料和方法

1.1 主要试剂和仪器

鼠PCNA单克隆抗体、PV免疫组化两步法试剂盒、DAB显色剂(北京中杉);多聚赖氨酸(Sigma美国);RM2135切片机(LEICA，德国);OLYMPUS CX71显微镜和照相系统、JEM－1200EX透射电镜(日本)。

1.2 标本制备

取出生后 2、5、7、9、14 d 不同发育阶段的BALB/C小鼠下颌第一磨牙牙胚(山东大学动物中心提供)25只，分别于麻醉后用新鲜配置的40 g/L多聚甲醛内固定，解剖分离下颌骨，40 g/L多聚甲醛 4℃下再固定1 d、100 g/L EDTA脱钙1～2个月，梯度乙醇脱水、石蜡包埋，近中远中向5 μm连续切片，行HE和免疫组化。

1.3 免疫组化

采用PV免疫组化法对Bcl－2表达进行组织定位。常规石蜡切片脱蜡、水化至水，30 mL/L过氧化氢液室温孵育10 min以灭活内源性过氧化物酶活性，滴加Bcl－2单克隆抗体(1∶100稀释)，37℃温箱孵育1 h。……