舒佳宾，文 李，官春云

(1国家油料作物改良中心湖南分中心，长沙410128;2长沙理工大学食品与生物工程系，长沙410114;3衢州市农业科学研究所，浙江衢州324000)

油菜是世界上除大豆之外的第二大油料作物，占全世界植物油供应的13%［1］。中国是油菜生产大国，种植面积和产量居世界之首，其产量和品质影响着中国食用油的安全。油菜菌核病常年发病率在10% ～30%［2］，每年 可 以 使油 菜的 产量 减 少15% ～30%，种子含油量也相应降低1% ～5%［3］。有研究表明，蛋白质组学技术的快速和高通量特点可为植物抗病研究提供新的方向［4，5］。

蛋白质双向电泳(Two－dimensional polyacrylamide gel electrophoresis，2 － DE)技术［6，7］是利用蛋白质等电点和分子量的不同来对蛋白质进行分离。它通过第一向的等电聚焦(Isoelectric focusing，IEF)使蛋白质按照等电点进行初次分离，然后通过第二向的聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS－PAGE)使蛋白质再按照分子量的大小进行第2次分离，进而得到蛋白质的二维分离图谱，图谱中的每个点代表样品中一个或多个蛋白质，而且可以同时呈现出蛋白质的等电点、分子量和在样品中相对含量等属性。近年来，该技术已经被成功的运用到拟南芥［8］、水稻［9，10］、小麦［11］、大豆［12］、烟草［13］、番茄［14］等植物的蛋白组学研究，而在油菜蛋白质组学研究中主要涉及油菜叶片［15］、花［16，17］、种子［18］、根系［19］等材料。笔者比较了甘蓝型油菜叶片蛋白质的提取方法，探讨了蛋白质双向电泳技术优化方案，为运用蛋白质组学方法研究甘蓝型油菜抗菌核病提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

供试材料为抗菌核病甘蓝型油菜近等基因系98c40和湘油15×98c40(由湖南农业大学油料作物研究所培育提供)，盛花期时利用牙签接种，取叶片进行实验。……