余 瑛，卫泽峰，郭志龙，黄伟九，陈波水

(1.重庆理工大学 a.药学与生物工程学院;b.材料科学与工程学院，重庆 400054;2.后勤工程学院军事油料应用工程系，重庆 401311)

石蜡油是石油制品之一，性能稳定，很难降解。1971年Felix和Cooney［1］就曾经报道能形成芽孢的细菌在石油降解中具有重要作用，但迄今为止人们对微生物降解石油的详细机制仍不完全清楚。芽孢杆菌具有在营养充足时以营养体形态存在，营养贫乏时形成芽孢的特性［2－5］。芽孢杆菌以营养体呈现，则表明其生长旺盛，代谢活跃;若进入芽孢形成期则表明其进入休眠状态，代谢活性降低，甚至停滞［6－7］。芽孢杆菌由营养体到芽孢形态的转变是对环境变化所产生的应答，该应答导致芽孢杆菌内基因表达类型发生改变，进而产生表型变化［8］。因此通过芽孢杆菌的形态变化可以间接了解其对石蜡油的降解情况，为进一步明确微生物降解石油制品的机理和利用生物降解法进行环境污染治理提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌种

芽孢杆菌由重庆理工大学药学与生物工程学院实验室筛选、保存。

1.1.2 试剂

1)培养基

无机盐培养基:NaNO30.1 g/L;KH2PO40.1 g/L;CaCl20.03 g/L;NH4NO30.15 g/L;MgSO40.1 g/L;(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O，痕量;pH 值为7.0～7.2。

模拟石蜡油污染废水:NaNO30.1 g/L;KH2PO40.1 g/L;CaCl20.03 g/L;NH4NO30.15 g/L;MgSO40.1 g/L;(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O，痕量;石蜡油2 g/L;pH值为7.0～7.2。

富集培养基:牛肉膏 5 g/L;蛋白胨10g/L;NaCl 5 g/L;pH值为7.0～7.2;若制备固体培养基，则另外加入琼脂15 g/L。

2)芽孢染色试剂

7.6%的孔雀绿石饱和水溶液;0.5%的番红溶液。

1.2 方法

1.2.1 石蜡油降解过程中芽孢杆菌的生长情况

从分离培养基平板上分别挑取各细菌的单菌落接种于富集培养基中，30℃，200 r/min培养24 h，然后离心收集菌体。……