李向利 宋会新 张术波

1.河北省迁西县人民医院胸外科，河北迁西 064300；2.华北煤炭医学院附属医院，河北唐山 063000

食管癌是常见的十大恶性肿瘤之一，其发病率与地理区域、饮食习惯、遗传因素、和病毒感染等有关。其发生、发展涉及多因素、多步骤相互作用的复杂过程，且与多种基因的表达改变紧密相连[1]。故通过了解相关基因如何表达和调控机制，为探查食管癌的病因及治疗提供新的理论基础。近年来具有高致病性的人乳头状瘤病（HPV）16/18与食管癌的相关性备受学者的关注。笔者收集唐山地区食管癌患者资料，探讨HPV16/18感染和p53基因多态性与食管癌的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2005年5月～2010年11月在迁西县人民医院手术或胃镜活检共85例唐山地区食管疾病患者的新鲜食管组织标本，45例为食管癌患者，其中，男31例，女14例；年龄45～73岁，平均（56.7±5.8）岁；临床分期按照国际食管癌会议制定的标准分期为Ⅰ期25例，Ⅱ期15例，Ⅲ期5例；有淋巴结转移16例，无淋巴结转移29例。另外20例良性肿瘤，20例正常食管组织。所有病例均经术前快速冷冻病理和术后常规病理检查确诊，术前均行未化疗、放疗及免疫治疗。

1.2 方法

1.2.1 HPV16/18的检测 采用原位杂交试剂盒和生物素标记的高危HPV16/18 DNA探针，与蜡块切片做DNA原位杂交。切片于60℃～70℃烘烤60 min脱蜡，置入杂交增强液里，高火加热30 min，冷却后用蒸馏水洗涤，滴加杂交液后盖上盖玻片，置原位PCR仪95℃变性5 min后，转入含30%湿盒增效液的湿盒中，维持37℃过夜，磷酸盐缓冲液（PBS）浸泡洗片，擦干后滴加内源性过氧化物酶阻断剂，37℃孵育30 min，PBS浸泡洗片，擦干后滴加动物非免疫血清，室温孵育20 min，PBS浸泡洗片，擦干后滴加DAB显色液，室温孵育10 min，PBS浸泡洗片，擦干后苏木素复染。……