张红飞，李军锋，户 义，张慧娜，鲍春旸，王凯娟#，周育森

1)郑州大学公共卫生学院流行病学教研室郑州450001 2)军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

重组表达乙肝病毒x蛋白的腺病毒构建及在HepG2细胞的表达*

张红飞1，2)，李军锋2)，户 义2)，张慧娜1)，鲍春旸2)，王凯娟1)#，周育森2)

1)郑州大学公共卫生学院流行病学教研室郑州450001 2)军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

#通讯作者，女，1964年10月生，博士，教授，研究方向:肿瘤流行病学，E-mail:kjwang@163.com

腺病毒载体;HBx基因;肝癌细胞

目的:构建重组表达HBx的腺病毒，并通过感染细胞建立HBx高表达的细胞模型。方法:首先将HBx基因插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack中，限制性酶切鉴定正确后将其用PmeⅠ酶切线性化，转到BJ5183感受态细菌进行同源重组，重组后的腺病毒载体pAd-HBx经PacⅠ酶切线性化后，转染到QBI-293A细胞中，根据EGFP的表达判断重组腺病毒的包装情况。RT-PCR鉴定重组腺病毒的HBx基因表达。根据GFP的表达检测病毒滴度和感染效率。将病毒感染人肝癌HepG2细胞，48 h后收集裂解细胞，Western blot检测HBx蛋白的表达。结果:重组腺病毒载体pAd-HBx经酶切鉴定确认构建成功。将pAd-HBx转染到QBI-293A细胞，荧光检测提示病毒获得成功包装，RT-PCR检测到细胞中HBx基因的表达。重组病毒感染人肝癌HepG2细胞，Western blot检测到HBx蛋白表达。结论:成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒，感染肝癌HepG2细胞后检测到了HBx蛋白的表达，提示建立了HBx高表达的细胞模型，为后续的HBx的功能研究奠定了基础。Military Medical Sciences，Beijing 100071

乙……