代伟丽，王艳萍，王菁蕊，白小佳

(食品营养与安全教育部重点实验室，天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457)

重组质粒pMG36e-nisI-gfp在乳酸菌中的应用

代伟丽，王艳萍，王菁蕊，白小佳

(食品营养与安全教育部重点实验室，天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457)

本研究将带有nisI和gfp(绿色荧光蛋白)基因的乳酸菌表达载体pMG36e-nisI-gfp转化至乳酸菌中，观察其在宿主内的稳定性．对重组菌进行了菌体形态、传代培养、质粒验证等研究，考察了该质粒的稳定性．结果显示：重组菌在不含抗生素的培养基中连续传代20代后，质粒丢失率低；菌体大小和形态基本不变；质粒经HindⅢ酶切后大小不变；GFP在第0、5、10、15和20代宿主菌中都可以表达，表达量没有明显差别，在SDS-PAGE中的带型一致；初步的动物实验验证了该质粒作为遗传标记的应用效果．说明该质粒在宿主菌中具有良好的稳定性．

绿色荧光蛋白；乳酸菌；质粒稳定性

乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)是一类能利用碳水化合物产生乳酸的革兰氏阳性杆菌或球菌，厌氧或兼性厌氧，是不能还原硝酸盐的一类细菌的总称[1].乳酸菌长期应用于食品发酵、生物医药工业，是被公认为安全的食品级微生物(generally regarded as safe，GRAS)．乳酸菌与人类生活密切相关，常见于肉类、奶油及蔬菜发酵制品中，能通过胃并定植于肠道发挥益生作用，如免疫调节[2]、对致病菌的拮抗作用[3]、降低血清胆固醇含量及预防心血管疾病[4]．但对其在体内的定植规律及在肠道微生物菌群中的作用研究较少．

本……