邓 梅，黄 洁，单 敏

(陕西省西安市食品药品检验所，陕西 西安 710054)

对氨基水杨酸钠片为结核病治疗的二线药物，由间氨基酚合成，合成后若精制不完全会有间氨基酚残留。间氨基酚既无疗效，又有毒性，故需要进行检查。其现行药品标准收载于1995年版《中国药典(二部)》[1]，但其有关物质测定国内尚未见有文献报道。笔者参考32版美国药典(USP32)及2010年版《中国药典(二部)》[2]，建立了测定对氨基水杨酸钠片中有关物质间氨基酚的高效液相色谱法，现报道如下。

1 仪器与试药

Ultimate U－3000型高效液相色谱仪(美国戴安公司);TU－1901型紫外－可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);Sartorius BSA124S－CW型万分之一天平;WT－2A型十万分之一机械天平(北京光学仪器厂)。对氨基水杨酸钠片(重庆迪康长江药业有限公司，批号为110301，110302，110303);间氨基酚对照品(中国食品药品检定研究院，批号为101160－201160，含量为99.8%);甲醇(色谱纯，Merck 公司)，水为高纯水(自制)，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Phenomenex Luna C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－10%四丁基氢氧化铵溶液－0.05 mol/L磷酸氢二钠－0.05 mol/L 磷酸二氢钠(200∶19∶400 ∶400);流速:1.0 mL/min;柱温:室温;检测波长:270 nm;进样量:20 μL。

2.2 溶液制备

精密称取间氨基酚对照品适量，用流动相溶解并稀释成质量浓度为73.00 μg/mL的对照品贮备液。取本品，除去糖衣，精密称取细粉适量(约相当于对氨基水杨酸钠35 mg)，置50 mL量瓶中，加流动相使对氨基水杨酸钠溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照溶液。

2.3 方法学考察

检测限确定:取间氨基酚的对照品贮备液，逐级稀释进样，当信噪比为3时，求得检测限为0.012 μg/mL。结果见图1。

图1 间氨基酚的检测限

线性关系考察:分别精密量取对照品贮备液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积 Y对质量浓度 X进行线性回归，得回归方程 Y=25 291.23 X+181.5，r=0.999 9(n=5)。结果表明，间氨基酚质量浓度在 0.365～1.825 μg/mL之间与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，在拟订的色谱条件下重复进样5次。结果的 RSD为0.11%(n=5)，表明方法精密度良好。

破坏试验:取本品1.0 g，置100 mL量瓶中，加流动相适量溶解并稀释到刻度，摇匀，滤过。分别精密吸取3份续滤液各10 mL，置100 mL量瓶中，分别加1 mol/L的盐酸溶液、1 mol/L的氢氧化钠溶液、10%的双氧水10 mL，室温、避光放置1 h，再加流动相稀释到刻度，分别作为酸、碱及氧化降解样品溶液。再取本品2份各0.5 g，一份于(4 500±500)lx日光灯下放置6 h，另一份于105℃干燥6 h，各取0.1 g，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释到刻度，分别作为光降解及热降解样品溶液。对以上5份供试品溶液分别进样20 μL，记录色谱图至主成分保留时间的4倍。结果降解产物峰与主峰分离度均符合要求，保留时间的3.5倍后再无杂质峰出现。综合考虑实际情况及原料标准的要求，故色谱图应记录至主峰保留时间的3.5倍。破坏试验结果见图2。可见，对氨基水杨酸钠在强酸、强碱、光照、氧化环境下均不稳定，在高温情况下比较稳定。

图2 对氨基水杨酸钠破坏试验色谱图

稳定性试验:取间氨基酚对照品溶液，在拟订的色谱条件下，分别于 0，2，4，8，12 h 进样。结果间氨基酚的 RSD 为 0.23%(n=5)，表明样品至少在12 h内稳定。

重复性试验:称取去包衣样品(批号为110302)细粉约0.05 g，共5份，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，测定有关物质。结果见表1。

表1 有关物质重复性试验结果

加样回收试验:分别精密称取去包衣样品(批号:110302)0.05 g，各3份，分别置50 mL容量瓶中，精密加入间氨基酚对照品贮备液(73.00 μg/mL)0.8，1.0，1.2 mL，按拟订的色谱条件进行测定。结果间氨基酚平均回收率为98.7%，RSD为1.4% 。

2.4 样品有关物质检测

称取样品0.05 g，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，按拟订的色谱条件测定。结果见表2。根据有关物质测定结果，参考2010年版《中国药典(二部)》原料药有关物质的限度，确定本品已知杂质间氨基酚量不得过对氨基水杨酸钠标示量的0.25%，其他杂质量不得过0.2%，总杂质量不得过1.0%，并将有关物质检查项收录到标准中。3批样品测定结果均符合规定。

表2 样品有关物质检测结果

3 讨论

本试验中，将间氨基酚配制成一定质量浓度，以流动相为空白，在200～300 nm波长范围内进行紫外扫描，结果在280 nm波长处有最大吸收，参考文献[2]方法，选择检测波长为280 nm。此色谱条件下，间氨基酚及对氨基水杨酸钠色谱峰分离度为7.5，远大于 1.5。

分别采用 Dionex Acclaim120－C18柱、Phenomenex Luna C18柱和Agilent Extend－C18柱3种色谱柱，结果主峰与各杂质分离度均大于1.5，符合要求，主峰理论板数均大于5 000。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，1995:3 257.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:1 150，1 158.