张火旺

(广东省河源市食品药品检验所，广东 河源 517000)

清淋颗粒由瞿麦、匾蓄、大黄、关木通、车前子、滑石、栀子、甘草等8味中药组方，具有清热泻火、利水通淋的功效，用于膀胱湿热所致的淋症、癃闭，症见尿频涩痛、淋沥不畅、小腹胀满、口干咽燥等症。现行标准[1]中，只有栀子苷的含量测定。为确保制剂质量，保证用药安全有效，选取君药大黄中的大黄酚和大黄素作为指标性成分进行含量测定研究。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定了清淋颗粒中大黄素和大黄酚的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－2010AHT型高效液相色谱仪；日本岛津UV－2450型紫外分光光度计；CP225D型电子天平；SB2200型超声处理器。甲醇(色谱纯，TEDIA)，磷酸(分析纯，广州市番禺力强化工厂)，水为超纯水；大黄素对照品(批号为110756－200110)，大黄酚对照品(批号为110796－201017)，供含量测定用，均购自中国食品药品检定研究院，含量均为100%；清淋颗粒(市售品)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇－0.1 mol/L磷酸溶液(85∶15)；检测波长：254 nm；流速：1.0mL/min；进样量：20μL。峰面积外标法定量[1]。

2.2 溶液制备

精密称取经五氧化二磷干燥24 h的大黄素对照品10.25mg，置50mL量瓶中，用无水乙醇－乙酸乙酯(2∶1)溶解至刻度，作为大黄素对照品贮备液；精密称取经五氧化二磷干燥24 h的大黄酚对照品11.38mg，置25mL量瓶中，用无水乙醇－乙酸乙酯(2∶1)溶解至刻度，作为大黄酚对照品贮备液。各用0.45μm滤膜滤过，即得对照品溶液。取本品，研细(过三号筛)，精密称取1.0g，置锥形瓶中，精密加乙醇25mL，密塞，称定质量，置水浴上加热回流1 h，放冷，用乙醇补足减失的质量，滤过，精密量取续滤液10mL，置烧瓶中，水浴蒸干，加30%乙醇－盐酸(10∶1)混合溶液15mL，置水浴中加热回流1 h，立即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15mL，合并三氯甲烷液，置水浴中蒸干，残渣用无水乙醇－醋酸乙酯(2∶1)溶解，移置25mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按其质量标准中处方比例同法制备不含大黄素和大黄酚的阴性样品，同法制备成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按上述色谱条件进样。结果两组分的出峰时间区域没有干扰的峰，表明处方中其他成分及辅料对样品的测定无干扰作用。见图1。

线性关系考察：分别精密量取大黄素对照品贮备液和大黄酚对照品贮备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，置100 mL量瓶中，加无水乙醇－醋酸乙酯(2∶1)至刻度并摇匀，配成混合对照品溶液，按上述色谱条件分别进样20μL，测定峰面积，以峰面积积分值(A)为纵坐标、大黄素与大黄酚对照品质量浓度(C)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程。大黄素为 A=134 040C+18 017，r=0.999 8；大黄酚为 A=216 687C－26 166，r=0.999 9。结果表明，大黄素与大黄酚的进样量分别在0.041 0～0.246 0μg和0.091 0～0.546 2μg范围内与相应的峰面积呈良好线性关系。

图1 高效液相色谱图

精密度试验：取同一混合对照品溶液，连续重复进样6次，测定峰面积。结果大黄素与大黄酚的 RSD分别为0.9%和1.0% (n=6)，表明仪器具有良好的精密度。

重复性试验：取同一批样品，精密称取6份，按样品测定方法平行测定两组分的含量。结果大黄素与大黄酚的 RSD分别为0.43%和0.25%(n=6)。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，每隔2h测定1次，连续测定6次。结果大黄素与大黄酚含量的 RSD分别为0.45%和0.26%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内测定，稳定性良好。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品(批号为20100801，大黄素含量0.369 5mg/g，大黄酚含量1.024 1mg/g)适量，共6份，分别精密加入用无水乙醇－醋酸乙酯(2∶1)制备的混合对照品溶液1.0，2.0，3.0 mL(大黄素0.11g/L、大黄酚0.26g/L)，水浴加热将其蒸干。按供试品溶液制备的方法制备，按2.1项下方法分别进样，记录色谱图，计算回收率。结果见表1。

表1 大黄素和大黄酚加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取4批样品，按2.2项下方法制备，进样，记录峰面积，按外标法计算含量。结果见表2。根据4批样品所测结果，暂订清淋颗粒中大黄素和大黄酚总量定量限为10.0mg/包。

表2 4批样品含量测定结果(mg/包，n=3)

3 讨论

采用高效液相色谱法，在选择检测波长时，取大黄酚和大黄素对照品适量，用无水乙醇－醋酸乙酯(2∶1)为溶剂，经紫外－可见分光光度计扫描，大黄酚和大黄素均在254 nm波长处有最大吸收，且大黄酚在254 nm波长处有很大吸收，灵敏度高，故选254 nm作为检测波长。用所建立的方法测定大黄素和大黄酚的含量，操作简便、快捷，精密度和准确度都较好。原标准只有栀子苷的含量测定，本法的建立有利于更好地控制药品质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：中国医药科技出版社，2010：1 132，22.