范红梅，刘志海，胡秋燕

(1.贵州省黔西南州食品药品检验所，贵州 兴义 562400; 2.贵州省黔西南州人民医院，贵州 兴义 562400)

健心安神合剂是由柴胡、黄芩、百合、白芍、酸枣仁、五味子、知母、川芎、茯苓、党参、大枣、甘草等15味中药组方的纯中药液体制剂，是医院治疗神经衰弱的一剂良方。该合剂以治疗失眠多梦、神疲乏力、头晕头痛、记忆力差、心情烦躁为主症，经临床应用，疗效显著。为保证和控制该制剂的质量，本试验对健心安神合剂进行了定性定量研究，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津LC－20AD型高效液相色谱仪及其色谱工作站。黄芩苷对照品(批号为 110745－200415)，柴胡对照药材(批号为120992－200705)，百合对照药材(批号为 121100－200402)，白芍对照药材(批号为120905－200508)，五味子对照药材(批号为120922－200606)，川芎对照药材(批号为 120918－200809)均购于中国药品生物制品检定所。健心安神合剂为自制(规格为100mL/瓶，批号为 20100925，20100926，20101008)。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂试药为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别 [1]

柴胡:取本品5mL，加甲醇15mL，振摇5min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5 g，加甲醇15mL，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，制成对照药材溶液。再取不含柴胡的阴性样品，依法制备阴性对照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯－乙醇－水(8∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液，在60℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(图1 A)。

百合:取本品5mL，加甲醇15mL，振摇5min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取百合对照药材1 g，加甲醇10mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，制成对照药材溶液。再取不含百合的阴性样品，依法制备阴性对照品溶液。吸取上述溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯－甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰(图1 B)。

白芍:取本品5mL，加无水乙醇15mL，振摇5min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取白芍对照药材0.5 g，加乙醇10mL，超声处理20min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5mL制成对照药材溶液。再取不含白芍的阴性样品，依法制备阴性对照品溶液。吸取上述溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(40 ∶5 ∶10 ∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5% 香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰(图1C)。

五味子:取本品5mL，加三氯甲烷20mL，加热回流30min，放冷，分取三氯甲烷层，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材0.5 g，同法制备对照药材溶液。再取不含五味子的阴性样品，依法制备阴性对照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰(图 1D)。

图1 薄层色谱图

川芎:取本品5mL，用乙醚分2次提取，每次10mL，合并乙醚层，挥干，残渣加乙酸乙酯0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材0.5 g，加乙醚20mL，加热回流1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯0.5mL使溶解，作为对照药材溶液。再取不含川芎的阴性样品，依法制备阴性对照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁烷－乙酸乙酯(9∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰(图1 E)。

2.2 黄芩苷含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Symmetry C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－0.4%磷酸溶液(47∶53);检测波长:278 nm;流速:1.0mL/min;柱温:常温;进样量:10μL;理论板数按黄芩苷峰计算不低于3 000。

2.2.2 溶液制备

精密称取60℃减压干燥6 h的黄芩苷对照品10.32 mg，置100mL棕色容量瓶中，加甲醇30mL，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，得质量浓度为103.2μg/mL的对照品溶液。精密量取本品5mL，置50mL容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液再用滤膜(0.45μL)滤过，即得供试品溶液。制备不含黄芩药材的健心安神合剂，精密量取5mL，依法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性考察:精密吸取阴性对照品溶液、对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，按拟订条件进行测定，可见黄芩苷在9 min左右出现色谱峰，阴性对照品溶液中无黄芩苷色谱峰，说明方法专属性良好。结果见图2。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取对照品溶液 1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，置 10mL 容量瓶中，加 50% 甲醇至刻度，摇匀，即得质量浓度为 10.32，20.64，41.28，61.92，82.56，103.2mg/L 系列浓度待测对照品溶液。分别吸取不同质量浓度的对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，以测得的峰面积值(Y)为纵坐标、黄芩苷的进样量(X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=57.339 2X+33.39，r=0.999 8。结果表明，黄芩苷质量浓度在10.32～103.2mg/L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取黄芩苷对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，重复进样5次。结果的 RSD为0.5%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:取同一样品(批号为20101008)5份，依法制备供试品溶液，精密量取10μL，注入高效液相色谱仪。结果黄芩苷的峰面积 RSD为0.8%(n=5)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一样品(批号为20101008)1份，依法制成供试品溶液，于 0，6，12，24，48 h时分别进样 10 μL 测定。结果的RSD为1.1%，表明供试品溶液在48 h内基本稳定。

加样回收试验:精密量取已知含量的样品(批号为20101008)6份，每份2.5 mL，分别精密加入黄芩苷对照品溶液(质量浓度为0.443 5mg/mL)各10mL，依法制成供试品溶液，吸取10μL，注入高效液相色谱仪检测。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

取3批样品，按上述方法处理和测定，计算黄芩苷的含量，结果测得3批健心安神合剂的黄芩苷含量在 1.843 ～2.053 g/L，暂定本品黄芩苷的含量不低于1.5 g/L(平均值下浮约 20%)。见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

健心安神合剂中黄芩在处方中用量较大，相对柴胡为臣药，故对其进行含量测定;黄芩苷的含量测定方法简单，条件易控制，有助于对医院制剂进行质量监控。

在色谱条件选择中，对不同流动相[2－6]和2005年版《中国药典(一部)》收载黄芩项下黄芩苷含量测定流动相及不同柱温条件进行了筛选，以流动相为甲醇－0.4%磷酸溶液(47∶53)，其黄芩苷峰型较好，与杂峰的分离度都较为理想，且此条件下杂质干扰较少;柱温的变化对其影响不大，故柱温选择常温。

健心安神合剂主要成分柴胡、百合、白芍、五味子、川芎采用薄层色谱法进行定性鉴别，色谱斑点明显，专属性强，可用于该制剂的定性鉴别。除以上5味药外，笔者也试图对其他药味进行过薄层色谱鉴别，但因方法专属性较差，背景多有干扰，故未列入本文。通过方法学考察，建立了健心安神合剂中黄芩苷的含量测定方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:附录ⅥB.

[2]张先平，李桃荣.高效液相色谱法测定肤康合剂中黄芩苷的含量[J].中国医院药学杂志，2008，28(22):1 967－1 968.

[3]周国运，张男方，郭 丽，等.接骨合剂的质量控制[J].中国医院药学杂志，2008，28(19):1 710 －1 711.

[4]王慧娟，姜清华，徐英宏，等.浓百合剂质量标准的改进[J].中国医院药学杂志，2008，28(17):1 510 －1 511.

[5]宋吉莲，吕凤莲，袁明辉.HPLC法测定双黄消炎片中黄芩苷的含量[J].中国药事，2005，19(11):677－678.

[6]方达任，刘 旭，高秀珍，等.麻芩口服液的质量控制[J].中国药师，2005，8(3):209 －210.