侯 嘉 ，连中学 ，杜 弢 ，陈红刚 ，朱田田 ，林 丽

(1.甘肃中医学院药学系，甘肃 兰州 730000; 2.甘肃省渭源县种子管理站，甘肃 定西 748299)

中药百合最早载于《神农本草经》，来源于百合科植物卷丹 Lilium lancifolium Thunb、百合 Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker或细叶百合 Lilium pumilum DC.的干燥肉质鳞叶，性味甘寒，有养阴润肺、清心安神之功，用于治疗阴虚久咳、痰中带血、虚烦惊悸、失眠多梦、精神恍惚等症[1]。江苏宜兴是药用百合的传统产地，其原植物为卷丹 Lilium lancifolium Thunb，商品称为“宜兴百合”。近20年来，卷丹的产地发生了很大变化，目前卷丹的主要产区分布在湖南龙山、安徽霍山及天长等地[2]。中药百合中含有皂苷、生物碱、多糖、磷脂、蛋白质、氨基酸、维生素、淀粉和大量微量元素等化学成分[3]。其中百合多糖具有增强耐缺氧能力、抗氧化及增强免疫作用，是百合的主要活性成分之一[4]。本研究中分别测定原产地与引种地卷丹中多糖及水溶性浸出物的含量，为评价引种后的卷丹质量提供参考。

1 材料、仪器与试药

2009年百合课题组赴卷丹的主产区引种，共收集江苏宜兴、安徽霍山县、湖南龙山等地卷丹样品19份，经甘肃中医学院药学系杜弢副教授鉴定为卷丹 Lilium lancifolium Thunb.。2010年春将收集到的样品种植于甘肃渭源，2010年秋采收。材料来源见表1。

UV1102型紫外可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司);BS－224S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);800型离心沉淀器(上海手术器械十厂);SHA－B型数显恒温水浴振荡器(常州荣冠实验分析仪器厂)。D－葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110833－200904，供含量测定用);其余试剂均为分析纯。统计分析均使用SPSS11.5软件。

表1 卷丹样品来源

2 方法与结果

2.1 水溶性总多糖的含量测定(蒽酮－浓硫酸法)[5]

2.1.1 溶液配制

精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品适量，置100 mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，制成0.151 2 mg/mL的对照品贮备液。称取卷丹样品约2 g，置250mL圆底烧瓶中，精密加入100mL蒸馏水，加热回流2 h，冷却至室温，过滤，精密吸取滤液 1.0mL，加入无水乙醇 5.0mL，摇匀，离心(3 000 r/min，30 min)，倾去上清液，沉淀加水溶解并转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.1.2 测定波长选择

精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1.0 mL，分置10 mL棕色具塞试管中，分别加入0.2%蒽酮－硫酸溶液4.0mL，混匀，迅速置冰水浴中冷却6min后，置100℃水浴中加热10min，取出，置冰水浴中5min，取出，室温放置10min后，于400～800 nm范围内进行光谱扫描。结果表明(图1)，对照品溶液和供试品溶液的最大吸收波长均为627 nm。

图1 百合多糖紫外扫描光谱图

2.1.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品贮备液 0，1.5，3.0，4.5，6.0，7.5，10.0mL，分别置 10mL 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。精密吸取上述各溶液1.0mL，置10mL棕色具塞试管中，照2.1.2项下操作，于627 nm波长处测定吸光度。以吸光度(Y)为纵坐标、质量浓度(X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=35.535X+0.056 1，r=0.994 8(n=7)。结果表明，葡萄糖质量浓度在0.004 536～0.030 24 g/L范围内与吸光度线性关系良好。

精密度试验:取质量浓度为0.151 2 g/L的对照品溶液，重复测定6次。结果吸光度的 RSD为1.28%，表明仪器的精密度良好。

稳定性试验:精密吸取新鲜配制的卷丹供试品溶液1.0mL，置10mL棕色具塞试管中，照2.1.2项下方法操作，分别于0，1.0，1.5，2.0，2.5，3 h 测定。结果吸光度的 RSD 为 1.36% ，表明供试品溶液在3 h内稳定。

重复性试验:分别称取卷丹样品约2 g，精密称定，平行6份，按2.1.1项下方法制得供试品溶液，按2.1.2项下操作，测定吸光度，计算百合多糖的百分含量。结果平均含量为9.654%，RSD为1.96%，表明方法重复性良好。

加样回收率试验:称取已测定含量的卷丹样品约0.2 g，精密称定，加入0.151 2 g/L的葡萄糖对照品溶液适量，按2.1.1项下提取方法共制得6份供试品溶液。将供试品溶液照2.1.2项下操作，测定吸光度并计算回收率。结果见表2。

2.1.4 样品总多糖含量测定

取不同来源卷丹样品各2 g，按2.1.1项下方法制得供试品溶液。精密吸取上述各供试品溶液1.0mL，置10mL棕色具塞试管中，照2.1.2项下操作，测定吸光度，按标准曲线法计算不同来源卷丹的多糖百分含量。

表2 加样回收试验结果(n=6)

2.2 水溶性浸出物含量测定[1]

将卷丹样品粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀。取供试品约4 g，精密称定，置250mL的锥形瓶中，精密加水100mL，密塞，冷浸，在振荡器中振摇6 h，再静置18 h，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量。以干燥品计算供样品中水溶性浸出物的含量。

2.3 结果

原产地与引种地卷丹中多糖及浸出物含量的测定结果见表3。可见，原产地卷丹浸出物含量高于引种地，但引种地卷丹中多糖含量明显高于原产地。

表3 原产地与引种地卷丹中多糖及水溶性浸出物的含量(%，n=3)

3 讨论

引种到甘肃渭源的卷丹和原产地的成分相比，多糖含量平均增加了约3倍。通过协方差分析(F=70.799，单侧 P=0.000)，卷丹引种前后多糖含量的差异有统计学意义。多糖是药用百合中主要的活性成分，春季降水少、夏季温度较低、秋季日照短有利于多糖的累积[6]。2010年，甘肃渭源县4月份平均降雨14.2 mm，8月份最高温度27.1℃，最低温度16.0℃，9月份平均日照时数150.5 h(甘肃省渭源县气象局)，可见甘肃渭源的气候环境有利于百合多糖的累积，其多糖含量远高于原产地，同时浸出物含量也符合《中国药典》(2010年版)要求。甘肃渭源种植卷丹的水溶性浸出物含量低于原产地，能否在甘肃大面积种植卷丹，还需进一步试验。

引种到甘肃渭源的卷丹和原产地的相比，浸出物的含量普遍下降。卷丹中浸出物含量与多糖含量无相关性(协方差分析，F=0.474，单侧 P=0.496 ＞0.05);可能由于药材不同的干燥方法造成引种地与原产地卷丹中浸出物含量差异，具体原因还需进一步研究。

卷丹预处理时不宜粉碎过细，否则加热提取易糊化，且在加热过程中应避免长时间高温回流。提取完成后，必须过滤，取滤液，防止药渣中的淀粉、纤维素等也能被浓硫酸水解成单糖而发生反应，使得结果不准确。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:123，174，附录 62.

[2]杜 弢，陈红刚，连中学，等.中药材百合生产现状及发展对策[J].中药材，2011，34(2):165 －168.

[3]曲伟红，周日宝，童巧珍，等.百合的化学成分研究概况[J].湖南中医药导报，2004，10(3):75－76.

[4]胡敏敏，蔡宝昌，张志杰，等.百合多糖的药效学研究[J].中药新药与临床药理，2007，18(2):107 －109.

[5]孙 俊，张科伟，秦昆明，等.不同产地百合多糖的含量测定[J].南京中医药大学学报，2010，26(1):65 －66.

[6]冯旭芹，崔秀明，陈中坚，等.三七有效成分与气候生态因子的相关性分析[J].中国农业气象，2006，27(1):16－18.