沈小钟 ，杨 帆 ，杨燕军 ，张现涛

(1.广东食品药品职业学院，广东 广州 510520; 2.暨南大学药学院，广东 广州 510632; 3.重庆市食品药品检验所，重庆 401121)

盐酸丙酰左卡尼汀是意大利Sigma－tau公司研发的用于治疗下肢动脉病变和慢性充血性心力衰竭的药物，1998年在意大利上市，主要成分是丙酰左卡尼汀盐酸盐(PLC)，是一种有效的抗体自由基剂，可以保护组织免受氧化损伤，疗效远高于左卡尼汀或乙酰左卡尼汀，可能是因其对骨骼和心脏肌肉具有很高的亲和力[1]。本试验中建立了反相高效液相色谱法测定丙酰左卡尼汀盐酸盐有关物质及含量，方法简便、结果可靠，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters2695－2996型高效液相色谱仪，Empower2色谱工作站。注射用丙酰左卡尼汀盐酸盐(Dromos，意大利Sigma－tau公司，批号为 071453/A，080959/A，081525/A);丙酰左卡尼汀盐酸盐对照品[自制，批号为080728，按无水物计含丙酰左卡尼汀盐酸盐(C10H20NO4Cl)含量为99.69%];左卡尼汀对照品(沈阳东宇药业有限公司，批号为080201，含量大于98.00%);乙酰左卡尼汀对照品(百灵威公司，批号为A0133667，含量大于98.00%);巴豆甜菜碱对照品[2](自制，批号为 BD08001，含量大于98.00%);甲醇、辛烷磺酸钠为色谱纯;水为纯净水;其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Angilent Zorbax SB－C18柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相:0.006mol/L辛烷磺酸钠溶液(每1000mL加三乙胺10mL，磷酸调 pH 至 2.9)－甲醇(95∶5);流速:1.0mL/min，柱温:35℃，检测波长:210 nm。精密量取对照品溶液10μL注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10% ～25%，再分别量取供试品溶液与对照溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。供试品溶液如有杂质峰，检测最大杂质与总杂质。丙酰左卡尼汀盐酸盐峰与杂质峰分离度应符合要求。

2.2 溶液制备

取本品适量，加流动相溶解并稀释成每1 mL约含40.0 mg丙酰左卡尼汀盐酸盐溶液，摇匀，即为供试品溶液;精密量取供试品溶液1mL，置100mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:按盐酸丙酰左卡尼汀的处方配制混合辅料溶液，按上述色谱条件进样。结果，制剂中辅料组分在210 nm波长处不干扰样品的测定。

检测限及定量限试验:取丙酰左卡尼汀盐酸盐溶液不断稀释，精密量取稀释液10μL，照上述色谱条件进样测定，信噪比为3∶1时即为检测限，信噪比为10∶1时即为定量限。试验结果表明，丙酰左卡尼汀盐酸盐的检测限为0.3888μg，定量限为1.944μg。

线性关系考察:取丙酰左卡尼汀盐酸盐对照品约100mg，精密称定，置5mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为母液。精密量取母液 1，1，1，0.1mL，分别置 2，5，10，2mL 容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为各浓度梯度的供试品溶液。精密量取供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。由供试品溶液浓度(C，以C10H20NO4Cl计)对峰面积(A)进行线性回归，得回归方程 A=2.1 ×105C+1.636 5 ×104(r=0.999 8)。结果表明，本品进样量在1.0036～20.072 g/L范围内线性关系良好。

精密度试验:取线性关系考察项下质量浓度为4.014 4 g/L的溶液，连续进样6次，记录色谱图，结果的 RSD为0.26%，表明本法精密度良好。

重复性试验:取样品(批号为080723)适量，共6份，分别加流动相溶解制成每1mL约含丙酰左卡尼汀盐酸盐4mg的溶液，作为供试品溶液。另精密称取丙酰左卡尼汀盐酸盐对照品适量，同法制成每1mL约含丙酰左卡尼汀盐酸盐4mg的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液及对照品溶液10μL注入色谱仪测定。结果的 RSD为0.47%，表明本方法重复性良好。

稳定性试验:取同一样品(批号为080723)适量加流动相溶解，制成每1mL约含丙酰左卡尼汀盐酸盐4mg的溶液，精密量取供试品溶液及对照品溶液 10 μL，分别于 0，1，2，4，6，8 h 时进样测定。结果进样精密度的RSD为0.31%，溶液稳定性的 RSD为1.55%，表明本法稳定性良好。

加样回收试验:取本品原料适量，与辅料按处方量的80%，100%，120%混合。精密称取本品原料80%，100%，120%，分别精密加入相应数量的辅料，每组不同比例各3份;加流动相溶解并定量稀释，作为供试品溶液。按含量测定项下的方法测定，计算回收率，结果见表1。可见，按照处方比例，投料量在80% ～120%时，本品含量测定方法的回收率良好。

表1 加样回收试验结果

中间精密度:由不同操作人员，于不同时间在不同仪器上照精密度试验项下方法对同一批(批号为080723)样品进行含量测定，结果的 RSD为0.29%，表明本法中间精密度良好。

有关物质检查:取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL约含40.0 mg丙酰左卡尼汀盐酸盐的溶液，摇匀，作为供试品溶液;精密量取供试品溶液1 mL，置100 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液10μL注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10% ～25%，再分别量取供试品溶液与对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。供试品溶液如有杂质峰，检测总杂质和单个最大杂质。结果见表2、图1和图2。

2.4 含量测定

取本品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1mL约含丙酰左卡尼汀盐酸盐4 mg的溶液，作为供试品溶液。另精密称取对照品适量，同法制成每1mL约含丙酰左卡尼汀盐酸盐4mg的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液及对照品溶液10μL进样测定，按外标法以峰面积计算本品的含量，结果批号分别为071453、080959、081525的样品含量分别为 99.01%，100.03%，100.12%。

表2 杂质含量比对结果(百分之一对照法，%)

图1 盐酸丙酰左卡尼汀的杂质结构图

图2 盐酸丙酰左卡尼汀高效液相色谱图

3 讨论

盐酸丙酰左卡尼汀作为左卡尼汀的升级产品，有着十分广阔的市场前景[3]，笔者通过试验建立的本方法可以为其质量研究提供参考。

试验发现，盐酸丙酰左卡尼汀中的有关物质主要是左卡尼汀失去一分子水的化合物巴豆甜菜碱(杂质A)、左卡尼汀(杂质B)和乙酰左卡尼汀盐酸盐(杂质C)。其中，巴豆甜菜碱需加入校正因子F后再按照百分之一对照法进行计算(F=A210PLC×C巴豆甜菜碱 /A210C巴豆甜菜碱 ×CPLC)，F值为0.013 06。左卡尼汀和乙酰左卡尼汀是临床常用药物，安全性较高，巴豆甜菜碱杂质亦为左卡尼汀和乙酰左卡尼汀中的有关物质[4]。

试验发现，不同批号盐酸丙酰左卡尼汀有关物质差异较大。其中，杂质A、杂质B随着时间延长含量有不断增加的趋势;随着保存时间延长，丙酰左卡尼汀盐酸盐有向左卡尼汀、巴豆甜菜碱、盐酸乙酰左卡尼汀转化的可能。

[1]Ilaria D，Francesco G，Barbara G，etal.Enantio－and chemo－selective HPLC separations by chiral－achiral tandem－columns approach:the combination of CHIR OBIOTIC TAGTM and SCX columns for the analysis of propionyl carnitine and related impurities[J].Journalof Chromatography A，2004，1 061(2):167 －173.

[2]范立强，袁琴生.大肠杆菌转化巴豆甜菜碱合成L－卡尼汀[J].中国医药工业杂志，1998，29(3):99 －102.

[3]唐玉亮，常 刚.左卡尼汀的临床应用进展[J].中国药业，2010，19(17):84－86.

[4]李 玺，李 薇，佟爱东.注射用乙酰左卡尼汀含量及有关物质的测定[J].今日药学，2008，18(5):24－25.