王其华，唐爱国，濮存海

南京中山制药有限公司，南京 210046

三七来源于五加科植物Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen的根和根基。主产于我国云南、广西等省区，是治疗心脑血管疾病的名贵中药，有散淤止血、消肿定痛的功效[1]。其主要有效成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1[1]。其用药部位为干燥根及根茎，习惯上将剪下的较粗支根称“筋条”；细小支根及须根称“绒根”；芦头称“剪口”，俗称“羊肠头”。主根依据大小，分为 20、40、60 头，80 头、无数头（500 克中的个数即是头数）等。研究表明[2]，过去作为末等品的芦头，其有效成分三七皂苷含量可能高于其它药用部分。因此，本文采用HPLC法测定3种皂苷，系统比较三七主根不同规格及不同药用部位含量，为三七资源的综合利用提供参考。2010版《中国药典》提取三七3种皂苷的方法为甲醇浸泡过夜，置80℃水浴上加热回流2 h。一方面浸泡过夜导致测定时间较长，另一方面直接甲醇提取所得供试品杂质较多，使得色谱柱使用寿命极短，增加了企业分析成本。因此本文同时对提取3种皂苷的方法进行改进。

1 仪器与试药

Agilent1260高效液相色谱仪（色谱柱:安捷伦ZORBAX SB-C18150 mm×4.6 mm，5 μm）；ML104/PL602-L电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。

人参皂苷Rg1（批号110703-200726）、人参皂苷Rb1（批号110704-200921，供含量测定用，纯度92.6%）、三七皂苷 R1（批号 110745-200617）均中国药品生物制品检定所提供；三七药材:40头、60头、80头、120头、200头、无数头三七以及三七剪口和病三七（患有根腐病，俗称“绿臭”）均购自云南省文山。乙腈（色谱纯）；水为纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相梯度洗脱（0～12 min乙腈占19%，12～60 min乙腈占19%～36%）；检测波长为203 nm。理论板数按三七皂苷R1峰计算不低于4000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg10.4 mg、人参皂苷Rb10.4 mg、三七皂苷R10.1 mg的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液制备方法考察

取同批药材，制成粉末，根据三七皂苷的理化性质及参考文献[3-4]，比较药典方法（序号1）、本文改进方法（序号2）及文献报道方法（序号3）等三种方法对3种皂苷的提取效果，见表1。可知方法2杂质峰少，杂质峰与目标峰能有效分离。方法1即药典方法色谱图见图1A，方法2色谱图见图1B。

表1 供试品溶液制备方法考察

图1 三七供试品色谱图（A）方法1；（B）方法2

2.4 线性关系考察

精密称取对照品人参皂苷Rg111.06 mg、人参皂苷Rb113.12 mg和三七皂苷R110.16 mg，分别置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀得对照品储备液。依次精密吸取上述对照品储备液一定量，用甲醇稀释成质量浓度为:人参皂苷Rg122.12、66.36、110.60、154.84、199.08 μg·mL-1； 人参皂苷 Rb126.24、65.60、104.96、144.32、183.68 μg·mL-1； 三七皂苷 R110.16、20.32、30.48、40.64、50.80 μg·mL-1的标准系列溶液。

按“2.1”项下色谱条件测定，混合对照品溶液进样10 μL，测得峰面积值为纵坐标（Y），对照品的量为横坐标（X），作回归方程。结果:人参皂苷Rg1回归方程为Y=5.8647X+2.3827，r2=1.0000，进样量在22.12 μg～199.08 μg 范围内呈良好的线性关系；人参 皂 苷 Rb1回 归 方 程 为 Y=4.199X-6.906，r2=0.9994，进样量在 26.24 μg～183.68 μg 范围内呈良好的线性关系；三七皂R1回归方程为Y=5.6043X+3.0025，r2=0.9992，进样量在 10.16 μg～50.80 μg 范围内呈良好的线性关系。

2.5 进样精密度试验

精密吸取混合对照品溶液（人参皂苷Rg1110.60 μg·mL-1、人参皂苷 Rb1104.96μg·mL-1、三七皂苷 R130.48 μg·mL-1）10 μL，连续进样 6 次，RSD 分别为0.51%、0.51%和0.58%。结果表明，进样精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批号药材，按“供试品溶液的制备”项依法制备6份，每份连续进样2次，每次10 μL。其RSD值分别为Rg11.71%、Rb111.99%、R12.64%，表明该方法有良好的重复性。

2.7 供试液稳定性

取供试品溶液，间隔一定时间（0、4、10、15、24 h）重复进样，每次进样 10 μL，共计进样 5次，测定其稳定性。其RSD值分别为Rg12.28%、Rb11.84%、R12.15%，表明样品溶液在24小时内稳定。

2.8 准确度试验

采用加样回收率方法，取已知含量的样品约0.5 g，精密称定，添加样品含量的80%、100%、120%的对照品，按照“供试品溶液的制备”项下方法依法制备样品溶液，按上述色谱条件测定。回收率分别为Rg199.5%、Rb199.0%、R199.9%，RSD 值分别为 Rg12.44%、Rb12.45%、R12.14%，表明本法准确度良好。

2.9 不同药用部位和不同规格三七含量测定

取同批药材的不同药用部位和不同规格三七药材，按“供试品溶液制备方法”平行制备2份，每份进2针。进样10 μL测定，测定平均值。结果见表2。不同规格三七含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R13种皂苷的总量顺序为40头＞80头＞200头＞120头＞无数头。不同药用部位含3种皂苷总量的顺序为剪口＞病三七（绿臭）＞筋条＞绒根。

3 讨 论

3.1 供试品溶液制备方法的选择

在对药材检验过程中发现，按2010版《中国药典》方法制备的供试品溶液对色谱柱要求较高且色谱柱使用寿命极短，因此本文考虑对药典方法进行改进。通过比较药典方法、文献方法和改进方法，3种皂苷提取率相当，而三七3种皂苷的提取方法，本文方法所得供试品溶液颜色明显变浅，杂质峰减少，可延长色谱柱使用寿命，降低分析成本。

表3 不同规格及不同药用部位三七三种皂苷含量测定结果（n=9）

3.2 不同药用部位及不同规格三七药材的收集

收集的所有三七药材均来自云南省文山。剪口、筋条、绒根是从40头三七的主根上所剪下；病三七是在40头三七的同一生长年限的同一片种植地里挑选出来的患有根腐病的根及根茎。保证了比较的科学性。

3.3 不同药用部位及不同规格三七药材中3种皂苷含量比较

3种皂苷的含量均是以干燥品计算而得，且均符合药典规定含量限度。含量测定结果可以看出，过去作为末等品的三七剪口3种皂苷总量最高，三七主根随着个头的增大3种皂苷的总量有逐渐升高趋势，而不同药用部位三七与三七主根不同头数间皂苷含量无明显相关。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部 [S].中国医药科技出版社，2010:11.

[2]高爱红.三七的质量评价与鉴别 [J].河北中医杂志，2004，26（9）:720.

[3]中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂·第10册[S].1995.

[4]高 瑛，翟永松，杜守颖，等.RP-HPLC法测定三七药材中总皂苷含量[J]. 中国药品标准，2011，12（5）:346.