刘春蕾， 李 鑫， 李蕊君， 何云云， 何昆仑△， 王莉莉

(1中国人民解放军总医院心内科，北京 100853;2南开大学医学院，天津 300071;3军事医学科学院毒物药物研究所，北京 100850)

PERK通路参与了缺氧心肌细胞的内质网应激及凋亡*

刘春蕾1，2， 李 鑫1， 李蕊君1， 何云云1，2， 何昆仑1△， 王莉莉3△

(1中国人民解放军总医院心内科，北京 100853;2南开大学医学院，天津 300071;3军事医学科学院毒物药物研究所，北京 100850)

目的:观察缺氧对原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞的损伤，探讨内质网应激在缺氧心肌损伤发生发展过程中起的作用及PERK通路是否参与其信号转导过程。方法:将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常对照组和缺氧1 h、4 h、8 h、12 h、24 h组，通过测定细胞ATP含量反映细胞活力;高内涵分析细胞成像系统检测多参数凋亡;采用免疫细胞化学和蛋白印迹方法检测以内质网为靶点的分子伴侣(GRP78和钙网蛋白)的表达，PERK通路(PERK和eIF2α)的磷酸化水平，以及其下游分子(ATF4和CHOP)在缺氧不同时点蛋白的表达变化特征。采用PERK通路激活型药物salubrinal处理原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞，观察药物是否对缺氧损伤的心肌细胞有保护作用。结果:缺氧引起心肌细胞凋亡，缺氧早期(约1 h)钙网蛋白和GPR78的表达上调;缺氧中期(4 h)p－PERK、p－eIF2α和ATF4的表达上调;缺氧后期(12 h)CHOP的表达上调。Salubrinal对缺氧心肌有保护作用。结论:在培养的心肌细胞中，缺氧可激发内质网应激。在缺氧早期激活PERK通路保护机体对抗缺氧损伤，后期激活细胞凋亡通路。

心肌细胞;内质网应激;缺氧;未折叠蛋白反应;细胞凋亡

心肌缺血触发心肌细胞发生持续性凋亡反应，使心肌细胞进行性丢失、胶原支架断裂、心室扩张和心室重塑，是多种心脏不良事件发生的重要原因［1］。……